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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)

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[求助] 诚心求教各位前辈：筛选扩增体系时的PCR图片，这是怎么回事啊？

紧急求教各位前辈：
刚开始做SCoT分子标记对玫瑰的最优扩增体系的筛选，刚刚开始跑PCR（普通的），结果结果成了这样，弥散的好厉害，尤其是第二次跑的这次，连marker都看不清楚，像重影似的，请教各位前辈能否给以指点，诚心求教出现这种情况的原因是什么，我该怎么解决啊？？？
我的扩增程序设定的为：94℃预变性 5 min；94℃变性 1 min，50℃退火 1 min，72℃ 延伸 2 min，共 36 个循环；72℃最后延伸 10 min。

11-7（筛）_副本.jpg

11-7（筛2）_副本.jpg

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1楼2013-11-07 20:26:09

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子潇杨帆

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-11-08 11:01:21
marker都出现弥散了，只有两种原因：1，你的marker质量出现问题。2，你的凝胶分辨率太高，将marker都给分辨了。但是第一个问题一般不会出现，所以应该是凝胶的分辨率太高，电压和胶浓度都有影响，稍微降低一下胶的浓 ...

我用的胶浓度为2%的，我会尝试一下降低胶的浓度，十分感谢！