应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR结果分析
141/2返回列表12下一页
查看: 1477  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jonew

木虫 (正式写手)

[求助] PCR结果分析

各路，请问哪些亮亮的拖带是怎么回事？我下一步该怎么改进？我的目的条带在2500bp ，模板是cDNA。急急急！！！！ 望各路大侠指点。。。
PCR结果分析
2013.9.26.pcr-2.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
借口很贱，，，
1楼 2013-09-27 10:43:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 21:20:10
jonew: 金币+1 2013-09-29 22:36:27
减少镁离子的量 提高退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
人物
3楼2013-09-27 17:23:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyhigh805

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 11:08:00
引用回帖:
6楼: Originally posted by jonew at 2013-09-29 18:18:21
你的意思是把它回收后，作为模板再P？...

恩，我以前也遇见过跟你一样的问题，采用二次PCR成功的P出了目的产物。你不用回收，直接取1ul PCR产物做模板即可。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-09-30 08:14:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiujiangfan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有几种方案可以尝试：
1、提高退火温度5℃。
2、加入2%BSA 1μ;
3、选用MIX做，不要分布加taq,dntp
4、减少模板量，20μl体系 cDNA加入1μl足以
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-10-01 15:16:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jonew: 金币+1 2013-09-29 22:36:20
往体系里面加点5%的DMSO再PCR试试
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-09-27 17:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyhigh805

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jonew: 金币+2 2013-09-29 22:36:35
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 11:07:41
cDNA模板体积不能加太多，一般不要超过PCR体系的十分之一。另外建议尝试提高退火温度
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-29 14:43:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyhigh805

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
jonew: 金币+2 2013-09-29 22:36:44
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 11:07:49
忘了说一点，你可以尝试采用上图中的PCR产物作为模板进行二次PCR，有可能把你的目的产物p出来。
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-29 14:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jonew

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by flyhigh805 at 2013-09-29 14:44:46
忘了说一点，你可以尝试采用上图中的PCR产物作为模板进行二次PCR，有可能把你的目的产物p出来。

你的意思是把它回收后，作为模板再P？
赞一下 回复此楼
借口很贱，，，
6楼2013-09-29 18:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1. 降低模板量（做个梯度，希望反转产物够）
2. 做复性温度梯度
3. 多试几种酶
4. 都没有的话，重新设计引物
赞一下 回复此楼
8楼2013-09-30 17:17:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
jonew: 金币+4 2013-10-02 15:46:13
拖尾条带是非特异性扩增的产物
推荐解决措施：
重新设计退火温度相对较低一些的引物
采用热启动的Taq酶，一些国产商业化的热启动酶也都不贵的，便宜好用（国产的比如Transgen的普通热启动酶250单位也才￥180，跟Takara、Thermo比起来价钱简直弱爆了。）
采用梯度退火温度PCR，退火温度从现在的退火温度开始依次提高，每次一度，直到65度左右（注意，我指的不是touch down）
缩短退火时间
降低镁离子、减少Taq酶的量（这个说实话真没觉得有啥必要了）
以这个产物为模板再进行PCR的话也可以一试，但是按照我们的经验基本不会有结果的
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-30 23:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jonew 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-14 18:36 by 正能量1斤
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭