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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR结果分析
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jonew

木虫 (正式写手)

[求助] PCR结果分析

各路，请问哪些亮亮的拖带是怎么回事？我下一步该怎么改进？我的目的条带在2500bp ，模板是cDNA。急急急！！！！ 望各路大侠指点。。。
PCR结果分析
2013.9.26.pcr-2.jpg
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借口很贱，，，
1楼 2013-09-27 10:43:07
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xiujiangfan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有几种方案可以尝试：
1、提高退火温度5℃。
2、加入2%BSA 1μ;
3、选用MIX做，不要分布加taq,dntp
4、减少模板量，20μl体系 cDNA加入1μl足以
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-10-01 15:16:32
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jonew: 金币+1 2013-09-29 22:36:20
往体系里面加点5%的DMSO再PCR试试
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-09-27 17:09:49
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zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 21:20:10
jonew: 金币+1 2013-09-29 22:36:27
减少镁离子的量 提高退火温度
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人物
3楼2013-09-27 17:23:16
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flyhigh805

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jonew: 金币+2 2013-09-29 22:36:35
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 11:07:41
cDNA模板体积不能加太多，一般不要超过PCR体系的十分之一。另外建议尝试提高退火温度
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-29 14:43:23
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