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jonew

木虫 (正式写手)

[求助] PCR结果分析

各路，请问哪些亮亮的拖带是怎么回事？我下一步该怎么改进？我的目的条带在2500bp ，模板是cDNA。急急急！！！！ 望各路大侠指点。。。
PCR结果分析
2013.9.26.pcr-2.jpg
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借口很贱，，，
1楼 2013-09-27 10:43:07
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白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1. 降低模板量（做个梯度，希望反转产物够）
2. 做复性温度梯度
3. 多试几种酶
4. 都没有的话，重新设计引物
赞一下 回复此楼
8楼2013-09-30 17:17:07
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jonew: 金币+1 2013-09-29 22:36:20
往体系里面加点5%的DMSO再PCR试试
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-09-27 17:09:49
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zr281069

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 21:20:10
jonew: 金币+1 2013-09-29 22:36:27
减少镁离子的量 提高退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
人物
3楼2013-09-27 17:23:16
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flyhigh805

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jonew: 金币+2 2013-09-29 22:36:35
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 11:07:41
cDNA模板体积不能加太多，一般不要超过PCR体系的十分之一。另外建议尝试提高退火温度
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-29 14:43:23
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