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jonew木虫 (正式写手)
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[求助]
PCR结果分析
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各路，请问哪些亮亮的拖带是怎么回事？我下一步该怎么改进？我的目的条带在2500bp ，模板是cDNA。急急急！！！！ 望各路大侠指点。。。 2013.9.26.pcr-2.jpg |
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 核酸生物学实验经验 |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
jonew: 金币+4 2013-10-02 15:46:13
jonew: 金币+4 2013-10-02 15:46:13
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拖尾条带是非特异性扩增的产物 推荐解决措施： 重新设计退火温度相对较低一些的引物 采用热启动的Taq酶，一些国产商业化的热启动酶也都不贵的，便宜好用（国产的比如Transgen的普通热启动酶250单位也才￥180，跟Takara、Thermo比起来价钱简直弱爆了。） 采用梯度退火温度PCR，退火温度从现在的退火温度开始依次提高，每次一度，直到65度左右（注意，我指的不是touch down） 缩短退火时间 降低镁离子、减少Taq酶的量（这个说实话真没觉得有啥必要了） 以这个产物为模板再进行PCR的话也可以一试，但是按照我们的经验基本不会有结果的 |
9楼2013-09-30 23:26:22
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
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2楼2013-09-27 17:09:49
3楼2013-09-27 17:23:16
4楼2013-09-29 14:43:23