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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR扩增效率
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dong_yue

金虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR扩增效率

我刚开始做RT-PCR，用的是仪器是7500，荧光燃料法，做标线时扩增效率总是在一百十几。求解决方法。
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1楼 2013-08-25 10:30:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-26 10:11:33
引用回帖:
4楼: Originally posted by dong_yue at 2013-08-25 16:39:56
溶解曲线主峰都在同个位置...

如果熔解曲线不是单一峰，说明有非特异扩增或者引物二聚体，这些产物也会发荧光，所以造成每增加一个循环，荧光的增加比两倍要多，计算出来的扩增效率就会大于100%。
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6楼2013-08-25 23:10:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-25 16:32:51
可能有非特异扩增或者引物二聚体。你查看熔解曲线了吗？
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2楼2013-08-25 12:54:57
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项羽1990

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
非特异扩增的问题吧，楼上说的有道理
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额
3楼2013-08-25 14:48:42
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dong_yue

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-25 12:54:57
可能有非特异扩增或者引物二聚体。你查看熔解曲线了吗？

溶解曲线主峰都在同个位置
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4楼2013-08-25 16:39:56
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