应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR扩增效率
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 2595  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dong_yue

金虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR扩增效率

我刚开始做RT-PCR，用的是仪器是7500，荧光燃料法，做标线时扩增效率总是在一百十几。求解决方法。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-25 10:30:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-25 16:32:51
可能有非特异扩增或者引物二聚体。你查看熔解曲线了吗？
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-25 12:54:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

项羽1990

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
非特异扩增的问题吧，楼上说的有道理
赞一下 回复此楼
额
3楼2013-08-25 14:48:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dong_yue

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-25 12:54:57
可能有非特异扩增或者引物二聚体。你查看熔解曲线了吗？

溶解曲线主峰都在同个位置
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-25 16:39:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dong_yue: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2013-08-25 21:28:19
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-25 22:38:30
1、楼主做的是qRT-PCR。
2、扩增效率过高，通常是引物引起的，引物使得非特异性条带（不是目的基因）大量产生，机器将这些非特异性条带的信号全部接受了，导致扩增效率过大。
3、qRT-PCR扩增效率正常值为95%-105%。
4、解决办法：更换引物，引物的pcr产物片段控制在200bp-300bp（我记得是，你再查查文献）。
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-25 18:41:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-26 10:11:33
引用回帖:
4楼: Originally posted by dong_yue at 2013-08-25 16:39:56
溶解曲线主峰都在同个位置...

如果熔解曲线不是单一峰，说明有非特异扩增或者引物二聚体，这些产物也会发荧光，所以造成每增加一个循环，荧光的增加比两倍要多，计算出来的扩增效率就会大于100%。
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-25 23:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

词行者

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-25 23:10:01
如果熔解曲线不是单一峰，说明有非特异扩增或者引物二聚体，这些产物也会发荧光，所以造成每增加一个循环，荧光的增加比两倍要多，计算出来的扩增效率就会大于100%。...

你傻啊你，人家明明说了在同一位置，同一位置，眼睛瞎啊
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-22 22:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wx26794

新虫 (初入文坛)
扩增效率跟阈值线位置有关，一般阈值线过低，计算得到的扩增效率会偏大，建议把阈值线调到log图线性部分的中段
赞一下 回复此楼
8楼2015-06-01 17:08:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dong_yue 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 310求调剂 +9 争取九点睡 2026-03-30 9/450 2026-03-30 11:44 by Wang200018
[考研] 化学308分调剂 +7 你好明天你好 2026-03-30 7/350 2026-03-30 11:02 by 1172367218
[考研] 311求调剂 +10 lin0039 2026-03-26 10/500 2026-03-30 10:26 by herarysara
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +7 26要上岸 2026-03-28 7/350 2026-03-29 20:04 by 无际的草原
[考研] 调剂310 +12 温柔的晚安 2026-03-25 13/650 2026-03-29 20:01 by 无际的草原
[考研] 327求调剂 +6 汲亦昊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:40 by peike
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[考研] 086000生物与医药调剂 +5 Feisty。 2026-03-28 9/450 2026-03-29 12:02 by longlotian
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +12 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-03-28 10:56 by self2008
[考研] 085602 307分 求调剂 +7 不知道叫什么！ 2026-03-26 7/350 2026-03-28 09:57 by 神马都不懂
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 0703化学求调剂，各位老师看看我！！！ +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭