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dong_yue

金虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR扩增效率

我刚开始做RT-PCR,用的是仪器是7500,荧光燃料法,做标线时扩增效率总是在一百十几。求解决方法。
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项羽1990

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
非特异扩增的问题吧,楼上说的有道理
3楼2013-08-25 14:48:42
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查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-25 16:32:51
可能有非特异扩增或者引物二聚体。你查看熔解曲线了吗?
2楼2013-08-25 12:54:57
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dong_yue

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-25 12:54:57
可能有非特异扩增或者引物二聚体。你查看熔解曲线了吗?

溶解曲线主峰都在同个位置
4楼2013-08-25 16:39:56
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dong_yue: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2013-08-25 21:28:19
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-25 22:38:30
1、楼主做的是qRT-PCR。
2、扩增效率过高,通常是引物引起的,引物使得非特异性条带(不是目的基因)大量产生,机器将这些非特异性条带的信号全部接受了,导致扩增效率过大。
3、qRT-PCR扩增效率正常值为95%-105%。
4、解决办法:更换引物,引物的pcr产物片段控制在200bp-300bp(我记得是,你再查查文献)。
5楼2013-08-25 18:41:45
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