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dong_yue

金虫 (小有名气)

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[求助] RT-PCR扩增效率

我刚开始做RT-PCR，用的是仪器是7500，荧光燃料法，做标线时扩增效率总是在一百十几。求解决方法。

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1楼 2013-08-25 10:30:38

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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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dong_yue: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2013-08-25 21:28:19
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-25 22:38:30

1、楼主做的是qRT-PCR。
2、扩增效率过高，通常是引物引起的，引物使得非特异性条带（不是目的基因）大量产生，机器将这些非特异性条带的信号全部接受了，导致扩增效率过大。
3、qRT-PCR扩增效率正常值为95%-105%。
4、解决办法：更换引物，引物的pcr产物片段控制在200bp-300bp（我记得是，你再查查文献）。