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wendell13

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 新人，请大侠赐教：构建重组质粒选择双酶切还是单酶切？

初次构建：
已排出了目的基因上已有的酶切位点
也查明多克隆位点上有好几个酶切位点可选择
疑惑该选单酶切还是双酶切？？

理论上单酶切不是比双酶切更简单么，为什么我看到网上众多的构建质粒都是采用双酶切，单酶切构建却比较少见到。。
问了实验室师姐答曰大家都是采用双酶切构建的。。晕

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1楼2013-07-18 12:04:21

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bleach060452

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-18 14:09:19

单酶切，目的片段两侧都得加同一个酶切位点

然后在连接时，质粒自连、目的片段自连、目的片段之间连接、目的片段+载体各种错误连接、目的片段反向连接等等，问题太多；导致后期筛选问题太多，很麻烦。
所以单酶切不是不行

还有没有其他问题，我就不知道了~~

个人理解

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岂能尽如人意，但求无愧我心

2楼2013-07-18 12:26:43

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