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双酶切后是否还要胶回收
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PGEX为何胶回收时只做双酶切?
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1楼
2013-07-31 03:37:18
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brownwolf1(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助!
2013-07-31 09:12:48
1.不需要(只要你酶切位点两端部分不大),如果PCR产物够纯,第一次回收都可以不做
2. 再次回收不知道,反正够ligation(胶上能看见,就能连出来,如果片段小有时候看不见都可以)。
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2013-07-31 05:25:19
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3楼
2013-07-31 11:58:42
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Haibara_Ai
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助
2013-07-31 14:00:20
1 最稳妥的是当然是做DNA clean up
2 如果不做得话 有些公司的(比如NEB的)buffer是可以加ATP和连接酶连接的。 不过之前当然要把内切酶失活(大部分常用酶可以加热失活)。不过没有特殊理由当然还是做clean up
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4楼
2013-07-31 12:12:23
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2013-08-01 10:13:58
有些公司的柱吸附式试剂盒分三种:质粒抽提、胶回收、PCR及酶反应产物纯化。这最后一种就是用来干你要做的事情的——PCR产物纯化、PCR产物酶切以后纯化、PNK反应后纯化、碱性磷酸酶反应后纯化……等等。
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5楼
2013-08-01 04:45:37
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