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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新人，请大侠赐教：构建重组质粒选择双酶切还是单酶切？
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wendell13

铁虫 (初入文坛)

[求助] 新人，请大侠赐教：构建重组质粒选择双酶切还是单酶切？

初次构建：
已排出了目的基因上已有的酶切位点
也查明多克隆位点上有好几个酶切位点可选择
疑惑该选单酶切还是双酶切？？

理论上单酶切不是比双酶切更简单么，为什么我看到网上众多的构建质粒都是采用双酶切，单酶切构建却比较少见到。。
问了实验室师姐 答曰大家都是采用双酶切构建的。。晕
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1楼2013-07-18 12:04:21
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wendell13

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-07-18 12:26:43
单酶切，目的片段两侧都得加同一个酶切位点

然后在连接时，质粒自连、目的片段自连、目的片段之间连接、目的片段+载体各种错误连接、目的片段反向连接等等，问题太多；导致后期筛选问题太多，很麻烦。
所以单酶 ...

所以，在双酶切和单酶切的可行的情况下，一般优选双酶切了？
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4楼2013-07-18 12:51:38
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wendell13

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-18 12:27:26
双酶切是两个不同的酶切位点，连接时基因序列的方向可控，单酶方向不可控，另外，单酶切载体容易发生自连，降低效率。

恩恩 所以实际实验中 双酶切一般优于单酶切使用？
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6楼2013-07-18 12:54:09
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wendell13

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gyesang at 2013-07-18 14:13:41
这个要取决于你是什么实际实验，一般如果你是往一个载体上插入片段的话，需要考虑方向的问题，这时候用双酶切比较好，
单酶切不是不能用，虽然有载体自连的问题，但可以通过载体去磷酸化处理，单酶切连接后，你需 ...

豁然开朗，谢谢~
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11楼2013-07-18 18:49:21
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