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raulcoco

金虫 (小有名气)

[交流] 酶切的片段跑时间长,小片段就没有了 已有5人参与

   一个很难做的clone,总算有点眉目了

但是不知道为什么,最后的质粒转化以后,挑单菌落,摇菌,提质粒,酶切之后,时间一长,小的片段就不见了,什么原因呢 ?

见下图
跑了30分钟之后,小的片段就没有了

15分钟的时候,还是能看到片段的,而且片段大小是对的
酶切的片段跑时间长,小片段就没有了
20130704.jpg
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只想给漂泊的文章找个家~~~
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-08 08:58:08
我觉得你提问的问题不一定存在!可能你忽略了什么细节,作为一个科研工作者,要想确定是时间的问题对照应该这样设:同一份酶切质粒分两份,先点一份跑电泳,15分钟以后再点另一份,再跑15分钟 (保证酶切产物,胶,电泳条件,染色条件相同),如果还能得到这种结果,我表示非常感兴趣!
不过就工作效率来考虑,我建议测序。
单酶切?看大小还不包括启动子,方向怎么确定的?
生命不息,探索不止。
4楼2013-07-07 18:43:27
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 是的,小片段换算出来的质量比较少,加上跑时间长,胶下部的EB往上跑没了,所以最后染色就会比较浅 2013-07-07 17:33:53
小片段的浓度不够高啊
2楼2013-07-07 16:41:25
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starseacow

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以在跑胶时,在下方的电泳槽里加一点EB,这样小片段可以看得清楚一点
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2013-07-07 18:03:27
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tiansiqin

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
通常跑胶时间过长条带会被稀释,你可以试一试使用EB
学会成长为自己的样子
5楼2013-07-15 10:53:20
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