24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 8380  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选没有菌落,或者都是白斑,是什么情况 已有1人参与

如题,我用TAKARA的DH5a, PMD18做克隆,按照试剂盒说明进行,载体与插入DNA分子按照3:1进行连接,16度三十分钟(也做过四个小时),以空载质粒作对照,37度培养14-16个小时,没有出现东西(20个小时候看到平板边缘出现小透明菌斑,中央好像菌落连在一片),但是空载质粒对照没有篮斑出现,请问这是什么原因?

[ Last edited by ljx2ljx on 2013-6-2 at 21:52 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhouking8758 at 2013-06-04 23:22:20
不长菌估计是感受态不行,或者氨苄浓度过高。感受态不好的可能性最大。
如果长的菌落正常,但是都是白斑,可能就是IPTG或者x-gal有问题。

已经找到原因,氨苄失效了,多谢各位
9楼2013-06-07 08:52:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ljx2ljx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-03 18:27:46
你做的是TA克隆?空的T载体不自连是好事吧。20小时培养时间太长了,可能是板上的氨苄失效了。没有蓝斑有可能是筛选药品的问题,你应该用一个pUC18之类的质粒做对照。
2楼2013-06-03 01:35:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-03 01:35:33
你做的是TA克隆?空的T载体不自连是好事吧。20小时培养时间太长了,可能是板上的氨苄失效了。没有蓝斑有可能是筛选药品的问题,你应该用一个pUC18之类的质粒做对照。

我做的是TA克隆,用的是PUC19质粒做对照,但是没有看到篮斑。甚至有些时候干脆都没有长菌落。
3楼2013-06-03 08:57:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ljx2ljx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-06-03 18:27:56
我前一段时间也在做蓝白斑筛选,一开始做的时候平板上长得也全是白斑,没有蓝斑,但是酶切鉴定时没有目的条带,最近情况有所好转,个人觉得应该是你转化的问题,在者就是你的连接体系中目的片段与载体的量的问题,
4楼2013-06-03 09:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 25/1250 2026-04-17 15:45 by qzxyhcsy
[考研] 335求调剂 +20 想上岸呀!! 2026-04-12 23/1150 2026-04-17 10:50 by cuisz
[考研] 恳请有学校收留 +8 柯淮然 2026-04-12 8/400 2026-04-17 09:34 by 猪会飞
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +23 hualkop 2026-04-12 25/1250 2026-04-16 22:12 by SUSE_CL
[考研] 急需调剂 +7 绝不放弃22 2026-04-15 7/350 2026-04-16 22:09 by SUSE_CL
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 290调剂生物0860 +38 哇哈哈,。 2026-04-11 44/2200 2026-04-16 09:52 by cuisz
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 生物学调剂 +9 纸扇zhishan 2026-04-13 9/450 2026-04-15 18:28 by AN流800
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 310求调剂 +16 666真好 2026-04-11 18/900 2026-04-15 13:28 by 黑科技矿业
[考研] 调剂求收留 +34 果然有我 2026-04-10 35/1750 2026-04-15 13:05 by 西北望—风沙
[考研] 各位老师好,求调剂,本科211,一志愿天津大学生物与医药学硕,差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 药学305求调剂 +10 玛卡巴卡boom 2026-04-10 10/500 2026-04-14 15:55 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见