24小时热门版块排行榜    

查看: 8330  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选没有菌落,或者都是白斑,是什么情况 已有1人参与

如题,我用TAKARA的DH5a, PMD18做克隆,按照试剂盒说明进行,载体与插入DNA分子按照3:1进行连接,16度三十分钟(也做过四个小时),以空载质粒作对照,37度培养14-16个小时,没有出现东西(20个小时候看到平板边缘出现小透明菌斑,中央好像菌落连在一片),但是空载质粒对照没有篮斑出现,请问这是什么原因?

[ Last edited by ljx2ljx on 2013-6-2 at 21:52 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-03 01:35:33
你做的是TA克隆?空的T载体不自连是好事吧。20小时培养时间太长了,可能是板上的氨苄失效了。没有蓝斑有可能是筛选药品的问题,你应该用一个pUC18之类的质粒做对照。

我做的是TA克隆,用的是PUC19质粒做对照,但是没有看到篮斑。甚至有些时候干脆都没有长菌落。
3楼2013-06-03 08:57:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ljx2ljx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-03 18:27:46
你做的是TA克隆?空的T载体不自连是好事吧。20小时培养时间太长了,可能是板上的氨苄失效了。没有蓝斑有可能是筛选药品的问题,你应该用一个pUC18之类的质粒做对照。
2楼2013-06-03 01:35:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ljx2ljx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-06-03 18:27:56
我前一段时间也在做蓝白斑筛选,一开始做的时候平板上长得也全是白斑,没有蓝斑,但是酶切鉴定时没有目的条带,最近情况有所好转,个人觉得应该是你转化的问题,在者就是你的连接体系中目的片段与载体的量的问题,
4楼2013-06-03 09:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-06-03 09:53:45
我前一段时间也在做蓝白斑筛选,一开始做的时候平板上长得也全是白斑,没有蓝斑,但是酶切鉴定时没有目的条带,最近情况有所好转,个人觉得应该是你转化的问题,在者就是你的连接体系中目的片段与载体的量的问题,

昨天又做了一次,以空载质粒作对照也没有长出菌落,那应该是感受态出毛病了吧
5楼2013-06-03 10:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂 +5 想上学吖吖 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:56 by 23Postgrad
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分,有科研经历,求调剂 +3 一瓶苯甲酸 2026-03-14 3/150 2026-03-19 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +7 小材化本科 2026-03-18 7/350 2026-03-19 10:46 by Linda Hu
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
信息提示
请填处理意见