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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选没有菌落，或者都是白斑，是什么情况
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ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选没有菌落，或者都是白斑，是什么情况 已有1人参与

如题，我用TAKARA的DH5a, PMD18做克隆，按照试剂盒说明进行，载体与插入DNA分子按照3：1进行连接，16度三十分钟（也做过四个小时），以空载质粒作对照，37度培养14-16个小时，没有出现东西（20个小时候看到平板边缘出现小透明菌斑，中央好像菌落连在一片），但是空载质粒对照没有篮斑出现，请问这是什么原因？

[ Last edited by ljx2ljx on 2013-6-2 at 21:52 ]
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1楼 2013-06-02 21:51:30
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zhouking8758

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不长菌估计是感受态不行，或者氨苄浓度过高。感受态不好的可能性最大。
如果长的菌落正常，但是都是白斑，可能就是IPTG或者x-gal有问题。
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8楼2013-06-04 23:22:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ljx2ljx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 18:27:46
你做的是TA克隆？空的T载体不自连是好事吧。20小时培养时间太长了，可能是板上的氨苄失效了。没有蓝斑有可能是筛选药品的问题，你应该用一个pUC18之类的质粒做对照。
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2楼2013-06-03 01:35:33
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ljx2ljx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-03 01:35:33
你做的是TA克隆？空的T载体不自连是好事吧。20小时培养时间太长了，可能是板上的氨苄失效了。没有蓝斑有可能是筛选药品的问题，你应该用一个pUC18之类的质粒做对照。

我做的是TA克隆，用的是PUC19质粒做对照，但是没有看到篮斑。甚至有些时候干脆都没有长菌落。
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3楼2013-06-03 08:57:55
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ljx2ljx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-06-03 18:27:56
我前一段时间也在做蓝白斑筛选，一开始做的时候平板上长得也全是白斑，没有蓝斑，但是酶切鉴定时没有目的条带，最近情况有所好转，个人觉得应该是你转化的问题，在者就是你的连接体系中目的片段与载体的量的问题，
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4楼2013-06-03 09:53:45
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