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西柚

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR 换了体系老是跑不出来

本人新手，扩的是人的DNA片段，大小是1400bp左右。10ul体系进行 PCR gradient，找到了退火温度，但换成50ul体系就扩不出来了，这样反复了三四次。后来换25ul的体系也扩不出来。后来我把水，酶，Buffer，dNTP，引物，DNA模板都换了新的，用25ul的体系跑梯度，结果还是没跑出来。不知道怎么回事啊，求助各位大神。
25ul体系：水：18.5ul;   10*Buffer: 2.5ul;  dNTP 2ul; 引物：1ul; Taq酶：0.5ul；DNA：1ul.
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1楼 2013-04-25 20:53:10
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西柚: 金币+1, ★有帮助 2013-04-25 21:20:12
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-25 21:24:54
本帖内容被屏蔽
2楼2013-04-25 21:03:03
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西柚

银虫 (初入文坛)
我也有过这种情况 。个人觉得是合适的体系没有找到。10ul到50ul体系的最佳条件发生了微妙的变化。你试着调节一下模板和酶的量
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3楼2014-10-26 11:33:43
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