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西柚

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR 换了体系老是跑不出来

本人新手,扩的是人的DNA片段,大小是1400bp左右。10ul体系进行 PCR gradient,找到了退火温度,但换成50ul体系就扩不出来了,这样反复了三四次。后来换25ul的体系也扩不出来。后来我把水,酶,Buffer,dNTP,引物,DNA模板都换了新的,用25ul的体系跑梯度,结果还是没跑出来。不知道怎么回事啊,求助各位大神。
25ul体系:水:18.5ul;   10*Buffer: 2.5ul;  dNTP 2ul; 引物:1ul; Taq酶:0.5ul;DNA:1ul.
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)

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西柚: 金币+1, 有帮助 2013-04-25 21:20:12
gyesang: 金币+2, 鼓励应助! 2013-04-25 21:24:54
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2楼2013-04-25 21:03:03
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西柚

银虫 (初入文坛)

我也有过这种情况 。个人觉得是合适的体系没有找到。10ul到50ul体系的最佳条件发生了微妙的变化。你试着调节一下模板和酶的量
3楼2014-10-26 11:33:43
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