24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1577  |  回复: 8

pygao

金虫 (正式写手)

[求助] 反转录后扩增有好几条带

我的RNA质量很好,反转录后扩增;师妹得到所有的目的条带,但我有两对引物扩增的目的条带像Market,有好几条且很明亮。我们用同样的细胞,但处理方式不同,用经过处理的细胞提RNA,做QRT-PCR。谁能告诉我可能的原因?谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-27 13:35:36
可能是引物特异性问题。此外,你的引物是否跨内含子,RNA反转录前是做了DNase消化?
2楼2013-03-24 11:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pygao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-24 11:43:54
可能是引物特异性问题。此外,你的引物是否跨内含子,RNA反转录前是做了DNase消化?

谢谢!我没有仔细看引物是否跨内含子,也没有做DNase消化,和师妹做的相同,我们用同样的引物,她的是一条带,我的是多条带,是不是RNA中含有DNA啊,我用mini RNase kit提的RNA,她用trizol提取的。
3楼2013-03-27 09:49:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:03:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by pygao at 2013-03-27 09:49:20
谢谢!我没有仔细看引物是否跨内含子,也没有做DNase消化,和师妹做的相同,我们用同样的引物,她的是一条带,我的是多条带,是不是RNA中含有DNA啊,我用mini RNase kit提的RNA,她用trizol提取的。...

不管用什么方法提的RNA,反转录前要消化DNA。否则基因组DNA会干扰qPCR。如果引物跨内含子的话,基因组模板P出来的带会与cDNA模板P出的不一样,如果没有跨内含子,两种模板P出同样的带。你的情况很可能是样品里混有基因组DNA,而且引物跨内含子。
4楼2013-03-27 12:25:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得可能是DNA污染的问题
5楼2013-03-27 12:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pygao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-27 12:25:47
不管用什么方法提的RNA,反转录前要消化DNA。否则基因组DNA会干扰qPCR。如果引物跨内含子的话,基因组模板P出来的带会与cDNA模板P出的不一样,如果没有跨内含子,两种模板P出同样的带。你的情况很可能是样品里混有 ...

是的,引物跨内含子了!
但我测定RNA结果很好,我很郁闷!
RNA中含有DNA扩出来就是两条带吗?我扩出来的像marker,大约有10条带,都挺亮的。
6楼2013-03-29 11:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
pygao(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-04-27 16:41:54
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 16:32:50
引用回帖:
6楼: Originally posted by pygao at 2013-03-29 11:58:02
是的,引物跨内含子了!
但我测定RNA结果很好,我很郁闷!
RNA中含有DNA扩出来就是两条带吗?我扩出来的像marker,大约有10条带,都挺亮的。...

RNA样品里有DNA的话,引物既可以用反转录出来的cDNA为模板,也可以用基因组DNA为模板。如果引物跨内含子,基因组为模板P出来的带要比cDNA模板P出来的大。如果你P出很多条带,说明引物的特异性有问题或者是退火温度不合适。
7楼2013-03-29 14:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

五维度的爱

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 16:32:57
应该是DNA污染,RNA提出来之后应该先用DNA酶处理之后才能做反转录
8楼2013-03-31 10:07:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zkwwh

新虫 (初入文坛)

我反转录的cDNA可以扩出来100bp的条带,可是扩不出来900bp的条带是什么原因呢?
9楼2013-12-17 16:20:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pygao 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +10 芋泥小铃铛 2026-03-28 10/500 2026-03-29 20:51 by 无际的草原
[考研] 296求调剂 +6 彼岸t 2026-03-29 6/300 2026-03-29 20:22 by 永字号
[考研] 求调剂 +4 青春裁为三截 2026-03-29 4/200 2026-03-29 15:01 by 唐沐儿
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学,化工,生物,生医工等专业优秀学子加入! +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 海纳百川Ly 2026-03-29 5/250 2026-03-29 09:57 by Sjndkwm
[考研] 289求调剂 +13 新时代材料 2026-03-27 13/650 2026-03-29 01:16 by 544594351
[考研] 复试调剂 +3 raojunqi0129 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:27 by 落睿可思
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-27 5/250 2026-03-28 14:25 by 唐沐儿
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +3 nhj_ 2026-03-25 3/150 2026-03-28 13:24 by Iveryant
[考研] 求调剂 +6 芦lty 2026-03-25 7/350 2026-03-28 13:13 by 唐沐儿
[考研] 材料求调剂一志愿哈工大324 +7 闫旭东 2026-03-28 9/450 2026-03-28 08:51 by Xu de nuo
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
信息提示
请填处理意见