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lifeileif

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】Takara试剂盒,合成cDNA看不到弥散,着急啊已有8人参与

我现在也在做cDNA-AFLP,用Takara试剂盒,货号D6130。我合成cDNA时候,遇到了的问题。第一链合成后,检测结果竟然和RNA电泳图差不多,隐约能看到两条带,分子量和rna也差不多,没有弥散,除了那两条模糊的带,什么都看不见。做了几次结果都差不多。万分着急,希望大侠们能帮我解决。着急中

图片,左面是提的RNA,右边mark后第一孔就是第一链了,第二孔是第二链,什么都看不到。求救啊,感谢感谢

附图
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吉他,计算机
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
mRNA只占总RNA的1%左右,而且是n多条混合物,你想反转录后就可以看到的可能性不大,直接切了加接头,预扩增之后才可以看的到条带,我觉得你还是先按照试剂盒的说明做下去才好
10楼2010-04-29 16:52:12
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普通回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
KIT ,你做不好的话,就不知道为什么了,或者你的RNA本身就有问题
2楼2010-04-29 10:33:02
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poog502

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我之前用TaKaRa的效果也不好,后来换了fermentas的反转录酶一下就做出来了,建议试试
3楼2010-04-29 10:41:23
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liyong1981

金虫 (正式写手)


很久很久以前,我好像用的普洛麦格的,很不错
4楼2010-04-29 10:55:38
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lifeileif

新虫 (初入文坛)

感谢楼上大仙们,是不是我的RNA浓度低啊
吉他,计算机
5楼2010-04-29 13:11:05
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

我觉得cDNA不用检测,往下做做,也许没有问题
6楼2010-04-29 15:04:14
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lifeileif

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-29 15:04:14:
我觉得cDNA不用检测,往下做做,也许没有问题

合成第一第二链都不要检测吗?cDNA要是看不到,哪酶切怎么检测啊?
吉他,计算机
7楼2010-04-29 16:45:18
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liyong1981

金虫 (正式写手)



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慢慢来
8楼2010-04-29 16:50:02
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poog502

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-04-29 10:55:38:
很久很久以前,我好像用的普洛麦格的,很不错

是promega把,晕死
9楼2010-04-29 16:51:55
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