24小时热门版块排行榜    

查看: 1859  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

pygao

金虫 (正式写手)

[求助] 反转录后扩增有好几条带

我的RNA质量很好,反转录后扩增;师妹得到所有的目的条带,但我有两对引物扩增的目的条带像Market,有好几条且很明亮。我们用同样的细胞,但处理方式不同,用经过处理的细胞提RNA,做QRT-PCR。谁能告诉我可能的原因?谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得可能是DNA污染的问题
5楼2013-03-27 12:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-27 13:35:36
可能是引物特异性问题。此外,你的引物是否跨内含子,RNA反转录前是做了DNase消化?
2楼2013-03-24 11:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pygao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-24 11:43:54
可能是引物特异性问题。此外,你的引物是否跨内含子,RNA反转录前是做了DNase消化?

谢谢!我没有仔细看引物是否跨内含子,也没有做DNase消化,和师妹做的相同,我们用同样的引物,她的是一条带,我的是多条带,是不是RNA中含有DNA啊,我用mini RNase kit提的RNA,她用trizol提取的。
3楼2013-03-27 09:49:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:03:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by pygao at 2013-03-27 09:49:20
谢谢!我没有仔细看引物是否跨内含子,也没有做DNase消化,和师妹做的相同,我们用同样的引物,她的是一条带,我的是多条带,是不是RNA中含有DNA啊,我用mini RNase kit提的RNA,她用trizol提取的。...

不管用什么方法提的RNA,反转录前要消化DNA。否则基因组DNA会干扰qPCR。如果引物跨内含子的话,基因组模板P出来的带会与cDNA模板P出的不一样,如果没有跨内含子,两种模板P出同样的带。你的情况很可能是样品里混有基因组DNA,而且引物跨内含子。
4楼2013-03-27 12:25:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +24 医学老男孩 2026-08-13 50/2500 2026-08-15 06:38 by 学员8dgXkO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
信息提示
请填处理意见