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zxl729

木虫 (正式写手)

[求助] mRNA反转录问题!

用oligo dT 引物反转录后,进行PCR扩增,跑胶结果出现了三条主带,这是mRAN降解造成的吗?
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-01-24 07:21:58
有可能是的,还有其他的原因,比如说提取的RNA有DNA基因组的污染,还有是PCR引物特异性不好,具体没有图,没有办法分析,总之楼主可以多试几次的,祝实验顺利。
风雪夜归人
2楼2013-01-23 21:48:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我认为P出多条带和mRNA降解的关系不大,2L也分析了可能的原因。你最好上个图并把问题描述清楚,大家也好帮你分析。
3楼2013-01-24 07:53:13
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liuqiuning

木虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得应该是引物特异性不高导致的,降解也不应该导致扩增条带变多!
4楼2013-01-24 08:47:23
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匿名

用户注销 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
5楼2013-01-24 10:43:10
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匿名

用户注销 (正式写手)

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本帖仅楼主可见
6楼2013-01-24 12:39:07
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
RNA有可能受到污染了。
蓝精灵
7楼2013-01-24 12:56:34
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zxl729

木虫 (正式写手)

非常感谢大家的回复,我用的是oligo dT反转,应该不会反转出rRNA吧。我用superscript 2进行的反转,但PCR出来的片段主要集中在1K以下,是没有得到全长cDNA,还是mRNA断裂造成的,图中marker从大到小为2K, 1K, 750bp, 500bp,250bp.
不同基因在细胞中的表达量应该是不一样的吧,所以主带是不是代表某个基因高表达呢??

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  • 2013-01-24 14:02:48, 73.88 K
8楼2013-01-24 14:03:04
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