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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » mRNA反转录2.3kb有没有问题
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)

[求助] mRNA反转录2.3kb有没有问题

用特异性引物，反转录出2.3kb的cDNA片段有没有问题？求大虾赐教，谢谢！
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1楼 2011-11-10 13:34:53
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mascotte

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-11-10 18:51:22
皇马铁卫(金币+1): 2011-11-11 09:50:35
一般的反转录酶扩增都没什么问题，一些试剂盒里阳性对照的RNA都是1kb以上的，2kb左右的mRNA，正常条件下没有难度。
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2楼2011-11-10 14:58:53
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

皇马铁卫(金币+2): 2011-11-11 09:50:37
建议楼主用INVITROGEN的SSII或是SSIII，如果一次性不到头的话，可以分成两段反转录，两端之间有一段的重叠区域，再做overlapping，做过3.123k的ORF，分成三段最后OVERLAPPING.
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jiayoubashaonian
3楼2011-11-10 21:59:28
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churchill87426

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

皇马铁卫(金币+1): 2011-11-11 09:50:11
我用宝生物的反转录试剂盒括过2.2kb的，没问题的。
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4楼2011-11-11 08:04:30
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-10 21:59:28:
建议楼主用INVITROGEN的SSII或是SSIII，如果一次性不到头的话，可以分成两段反转录，两端之间有一段的重叠区域，再做overlapping，做过3.123k的ORF，分成三段最后OVERLAPPING.

没接触过overlapping，可不可以麻烦给我介绍下怎么做啊，包括所用到的试剂什么的，谢谢
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春晓赏花，夏日听蝉，箫吹秋月，酒饮冬霜~
5楼2011-11-11 09:49:44
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-11 11:58:36
wanhscn(MolEPI+1): 对楼主有帮助! 2011-11-11 11:59:03
皇马铁卫(金币+1): 2011-11-11 16:28:46
引用回帖:
5楼: Originally posted by 皇马铁卫 at 2011-11-11 09:49:44:
没接触过overlapping，可不可以麻烦给我介绍下怎么做啊，包括所用到的试剂什么的，谢谢

呵呵，楼主可以搜一下，试剂没有特殊要求，引物设计时上下两端要有重叠区，手边也没有现成的资料，回头我再找一下，祝楼主实验顺利！
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jiayoubashaonian
6楼2011-11-11 10:43:43
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-11 10:43:43:
呵呵，楼主可以搜一下，试剂没有特殊要求，引物设计时上下两端要有重叠区，手边也没有现成的资料，回头我再找一下，祝楼主实验顺利！

多谢
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春晓赏花，夏日听蝉，箫吹秋月，酒饮冬霜~
7楼2011-11-11 10:53:27
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云霆子

金虫 (小有名气)
没有问题，我使用的是PrimeScript，做过3kb的。
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8楼2011-11-12 23:56:41
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