24小时热门版块排行榜    

查看: 4849  |  回复: 6
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

wallace13145

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助我反转录跑胶结果

请问大家我检测反转录成功与否为什么目的条带下还有个微弱的条带?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

mengfei8336: MolEPI+1, 多谢关注。 2012-07-18 21:13:12
引用回帖:
2楼: Originally posted by lishenchi at 2012-07-18 20:05:27
楼主我想请教一个问题,一直不太懂。CDNA理论上应该多大啊?全都是一样大吗?还是有好多好多的mRNA,所以逆转录应该出来好多大小的cDNA,所以应该有好多好多条带
??这个问题一直困扰我

mRNA各种大小都有,cDNA也是一样的。
反转录一般有三种引物:
1.Oligo dT可以结合mRNA的多聚A尾巴,用来反转录所有mRNA;
2.随机引物,可结合到各种RNA上,可以反转录几乎所有的RNA。
上述两种引物的反转录产物包含各种大小的片段,而且浓度都不会太高(跟PCR产物没得比的哈),所以跑胶的话是弥散整个泳道的淡淡一片。
3.基因特异的引物,原理类似PCR引物,只反转录特定的片段,这种反转录的产物量就更少了,跑胶的话几乎是看不到东西的。
4楼2012-07-18 21:08:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lishenchi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主我想请教一个问题,一直不太懂。CDNA理论上应该多大啊?全都是一样大吗?还是有好多好多的mRNA,所以逆转录应该出来好多大小的cDNA,所以应该有好多好多条带
??这个问题一直困扰我
2楼2012-07-18 20:05:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
RT之后又检测的必要吗?mRNA的量很少的,提完总RNA之后,跑胶根本就看不到mRNA,你做完RT后怎么能跑出来条带呢?我很纳闷
3楼2012-07-18 20:33:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-19 15:16:32
你这个是反转后做的actin检测吧,检测结果比较好,应该可以做下一步,下面那个隐隐条带应该是二聚体,如果定量时溶解曲线没问题那就没问题。
5楼2012-07-19 11:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wallace13145

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-18 20:33:06
RT之后又检测的必要吗?mRNA的量很少的,提完总RNA之后,跑胶根本就看不到mRNA,你做完RT后怎么能跑出来条带呢?我很纳闷

不是检测rna的,是跑cdna
6楼2012-07-20 15:06:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

mRNA的量很小,所以我认为cDNA的量也同样不足以检测到
7楼2012-07-20 15:47:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wallace13145 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 328,0703考生求调剂,一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 0703,333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] (081700)化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
请填处理意见