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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助我反转录跑胶结果
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wallace13145

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助我反转录跑胶结果

请问大家我检测反转录成功与否为什么目的条带下还有个微弱的条带？
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1楼 2012-07-18 16:18:40
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lishenchi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主我想请教一个问题，一直不太懂。CDNA理论上应该多大啊？全都是一样大吗？还是有好多好多的mRNA,所以逆转录应该出来好多大小的cDNA,所以应该有好多好多条带
？？这个问题一直困扰我
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2楼2012-07-18 20:05:27
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RT之后又检测的必要吗？mRNA的量很少的，提完总RNA之后，跑胶根本就看不到mRNA，你做完RT后怎么能跑出来条带呢？我很纳闷
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3楼2012-07-18 20:33:06
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

mengfei8336: MolEPI+1, 多谢关注。 2012-07-18 21:13:12
引用回帖:
2楼: Originally posted by lishenchi at 2012-07-18 20:05:27
楼主我想请教一个问题，一直不太懂。CDNA理论上应该多大啊？全都是一样大吗？还是有好多好多的mRNA,所以逆转录应该出来好多大小的cDNA,所以应该有好多好多条带
？？这个问题一直困扰我

mRNA各种大小都有，cDNA也是一样的。
反转录一般有三种引物：
1.Oligo dT可以结合mRNA的多聚A尾巴，用来反转录所有mRNA；
2.随机引物，可结合到各种RNA上，可以反转录几乎所有的RNA。
上述两种引物的反转录产物包含各种大小的片段，而且浓度都不会太高（跟PCR产物没得比的哈），所以跑胶的话是弥散整个泳道的淡淡一片。
3.基因特异的引物，原理类似PCR引物，只反转录特定的片段，这种反转录的产物量就更少了，跑胶的话几乎是看不到东西的。
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4楼2012-07-18 21:08:10
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-19 15:16:32
你这个是反转后做的actin检测吧，检测结果比较好，应该可以做下一步，下面那个隐隐条带应该是二聚体，如果定量时溶解曲线没问题那就没问题。
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5楼2012-07-19 11:37:20
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wallace13145

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-18 20:33:06
RT之后又检测的必要吗？mRNA的量很少的，提完总RNA之后，跑胶根本就看不到mRNA，你做完RT后怎么能跑出来条带呢？我很纳闷

不是检测rna的，是跑cdna
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6楼2012-07-20 15:06:42
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

mRNA的量很小，所以我认为cDNA的量也同样不足以检测到
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7楼2012-07-20 15:47:17
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