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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » mRNA反转录问题！
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zxl729

木虫 (正式写手)

[求助] mRNA反转录问题！

用oligo dT 引物反转录后，进行PCR扩增，跑胶结果出现了三条主带，这是mRAN降解造成的吗？
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1楼2013-01-23 21:41:06
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-01-24 07:21:58
有可能是的，还有其他的原因，比如说提取的RNA有DNA基因组的污染，还有是PCR引物特异性不好，具体没有图，没有办法分析，总之楼主可以多试几次的，祝实验顺利。
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风雪夜归人
2楼2013-01-23 21:48:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我认为P出多条带和mRNA降解的关系不大，2L也分析了可能的原因。你最好上个图并把问题描述清楚，大家也好帮你分析。
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3楼2013-01-24 07:53:13
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liuqiuning

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得应该是引物特异性不高导致的，降解也不应该导致扩增条带变多！
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4楼2013-01-24 08:47:23
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匿名

用户注销 (小有名气)
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5楼2013-01-24 10:43:10
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匿名

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6楼2013-01-24 12:39:07
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

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RNA有可能受到污染了。
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蓝精灵
7楼2013-01-24 12:56:34
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zxl729

木虫 (正式写手)
非常感谢大家的回复，我用的是oligo dT反转，应该不会反转出rRNA吧。我用superscript 2进行的反转，但PCR出来的片段主要集中在1K以下，是没有得到全长cDNA,还是mRNA断裂造成的，图中marker从大到小为2K, 1K, 750bp, 500bp,250bp.
不同基因在细胞中的表达量应该是不一样的吧，所以主带是不是代表某个基因高表达呢？？
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8楼2013-01-24 14:03:04
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