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taigongzaici

新虫 (小有名气)

[求助] 请问那位大侠做过海带的基因克隆，给指导传授一下经验，不胜感激！！！

请问各位高手，

我在做海带的基因克隆，用CTAB法提取RNA，然后反转录cNNA，然后用18S的引物进行模板验证，可惜没有扩增出目的条带，请问那位大侠做过海带的基因克隆，给指导传授一下经验，不胜感激！！！！
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1楼 2011-07-20 09:46:47
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 鼓励应助。 2011-07-20 16:20:59
taigongzaici(金币+1): 2011-07-21 09:53:38
taigongzaici(金币+1): 感谢参与 2011-07-21 12:51:59
海带的基因克隆应该与其他植物的克隆是一样的。
处理样本一定要用液氮研磨，要取新鲜的海带。
不知道你抽提完RNA，有没有跑电泳看一下，RNA抽提的效果如何？
RNA抽提结束，要么就马上放入-80度冰箱要么就马上进行反转录cDNA。
只要RNA顺利抽提出来了，CDNA的条件合适，是很容易克隆的
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2楼2011-07-20 10:09:35
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
这样的常规的操作我知道，呵呵，但是我想问问做过海带的人，海带这个材料很特殊，呵呵，还是很感谢昂
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3楼2011-07-20 12:22:31
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libing198968

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

taigongzaici(金币+6): 3 2011-07-24 19:44:40
本人做紫菜的，师姐的基因克隆一直没做出来，毕业走了，大型海藻都不好做，我接着师姐的实验继续做，现在才刚开始，以后可以多多交流哈。
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生活没有彩排，所以任何时候都要好好表现，因为你没有再来一次
4楼2011-07-22 09:21:59
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healerly

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2011-07-22 09:30:51
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yf-deng

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-22 12:11:54
taigongzaici(金币+2): 2011-07-24 19:44:27
材料特殊，抽提RNA的质量很关键，下面的和常规的没有什么两样了。在保证RNA质量的前提下，克隆则引物的特异性一定要好！
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6楼2011-07-22 09:40:28
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冷眼倦天涯

金虫 (小有名气)
你好，我也正想做这方面的，但是现在提取RNA还没有解决，提的RNA质量太差OD260/280约1.0-1.5，OD260/230约是0.5，各种方法都试过了但是每次提取的效果越来越不好。能指导一下吗 ？
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7楼2015-04-25 14:59:43
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