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taigongzaici

新虫 (小有名气)

[求助] 请问那位大侠做过海带的基因克隆,给指导传授一下经验,不胜感激!!!

请问各位高手,

我在做海带的基因克隆,用CTAB法提取RNA,然后反转录cNNA,然后用18S的引物进行模板验证,可惜没有扩增出目的条带,请问那位大侠做过海带的基因克隆,给指导传授一下经验,不胜感激!!!!
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 鼓励应助。 2011-07-20 16:20:59
taigongzaici(金币+1): 2011-07-21 09:53:38
taigongzaici(金币+1): 感谢参与 2011-07-21 12:51:59
海带的基因克隆应该与其他植物的克隆是一样的。
处理样本一定要用液氮研磨,要取新鲜的海带。
不知道你抽提完RNA,有没有跑电泳看一下,RNA抽提的效果如何?
RNA抽提结束,要么就马上放入-80度冰箱要么就马上进行反转录cDNA。
只要RNA顺利抽提出来了,CDNA的条件合适,是很容易克隆的
2楼2011-07-20 10:09:35
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taigongzaici

新虫 (小有名气)

这样的常规的操作我知道,呵呵,但是我想问问做过海带的人,海带这个材料很特殊,呵呵,还是很感谢昂
3楼2011-07-20 12:22:31
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libing198968

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

taigongzaici(金币+6): 3 2011-07-24 19:44:40
本人做紫菜的,师姐的基因克隆一直没做出来,毕业走了,大型海藻都不好做,我接着师姐的实验继续做,现在才刚开始,以后可以多多交流哈。
生活没有彩排,所以任何时候都要好好表现,因为你没有再来一次
4楼2011-07-22 09:21:59
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healerly

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

5楼2011-07-22 09:30:51
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yf-deng

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-22 12:11:54
taigongzaici(金币+2): 2011-07-24 19:44:27
材料特殊,抽提RNA的质量很关键,下面的和常规的没有什么两样了。在保证RNA质量的前提下,克隆则引物的特异性一定要好!
6楼2011-07-22 09:40:28
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冷眼倦天涯

金虫 (小有名气)

你好,我也正想做这方面的,但是现在提取RNA还没有解决,提的RNA质量太差OD260/280约1.0-1.5,OD260/230约是0.5,各种方法都试过了但是每次提取的效果越来越不好。能指导一下吗 ?
7楼2015-04-25 14:59:43
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