24小时热门版块排行榜    

查看: 2100  |  回复: 5

hathaway_

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA条带总是有杂带

别人跑的DNA都是仅有拖尾,而我的有两个问题!
1,是在目的条带前面总会有一片杂背景,应该是是小分子的DNA,各位大侠,请教一下,是不是因为我做的是组织,所以没有别人的细胞什么的那么纯粹,总有其他物质干扰?????
2,目的条带不是很直,如图中间总是有点小尾巴,是为什么?有人说是加样时候的问题,可我改进加样后(尽量抬高一点加样,以免枪头损伤了胶孔),还是有一点问题!请教各位!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

多多交流
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

标题是RNA,里面内容又冒个DNA提取出来...究竟是?
你用什么方法提的?有详细的操作或试剂使用别人才能跟你分析结果啊。
伟大航线....
2楼2012-06-13 09:25:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hathaway_

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2012-06-13 09:25:44
标题是RNA,里面内容又冒个DNA提取出来...究竟是?
你用什么方法提的?有详细的操作或试剂使用别人才能跟你分析结果啊。

题目笔误  呵呵,我用trizol提的RNA,然后反转录成DNA,然后跑条带!
提取过程应该没问题,就是扩增这个体系需要优化,我又跑了梯度PCR,找寻最佳反应体系,试了57,59,60,61,63五个退火温度,试了两个引物浓度,20umol和10umol!
自我感觉60的退火温度目的条带更好一些,而10umol的引物浓度比20的更好些,但还是在100bp的位置靠下面还是有尾巴,请问我还需要再试更低的引物浓度吗?有人说是因为引物浓度过大引起下面的小片段处出现的尾巴!我刚开始做,经验不足,希望高手给分析下可能有的问题!!!
多多交流
3楼2012-06-15 22:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

第二个问题,应该是电泳槽电压不稳定,或跑胶的缓冲液的问题,建议两个都换一下试试
之前我的凹形的,换了缓冲液后就好了
我们的过去,成就了如今的我们,无需悔恨
4楼2012-06-16 11:06:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mungbean3881

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也可能是点样量比较多的原因,有时候减少点样量,条带就不会有拖尾
吃亏未必是祸,占便宜一定不是福
5楼2012-06-16 14:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

是反转录后用cDNA做模板来扩增PCR对吧?
如果PCR产物不特异那就是引物设计方面的问题。可以像你现在这样调整一下退火温度,或再去blast一下。
伟大航线....
6楼2012-06-17 09:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hathaway_ 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见