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hathaway_

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[求助] RNA条带总是有杂带

别人跑的DNA都是仅有拖尾，而我的有两个问题！
1，是在目的条带前面总会有一片杂背景，应该是是小分子的DNA，各位大侠，请教一下，是不是因为我做的是组织，所以没有别人的细胞什么的那么纯粹，总有其他物质干扰？？？？？
2，目的条带不是很直，如图中间总是有点小尾巴，是为什么？有人说是加样时候的问题，可我改进加样后（尽量抬高一点加样，以免枪头损伤了胶孔），还是有一点问题！请教各位！！！

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多多交流

1楼 2012-06-12 22:54:43

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longrna

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标题是RNA，里面内容又冒个DNA提取出来...究竟是？
你用什么方法提的？有详细的操作或试剂使用别人才能跟你分析结果啊。

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伟大航线....

2楼2012-06-13 09:25:44

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hathaway_

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by longrna at 2012-06-13 09:25:44
标题是RNA，里面内容又冒个DNA提取出来...究竟是？
你用什么方法提的？有详细的操作或试剂使用别人才能跟你分析结果啊。

题目笔误呵呵，我用trizol提的RNA,然后反转录成DNA，然后跑条带！
提取过程应该没问题，就是扩增这个体系需要优化，我又跑了梯度PCR，找寻最佳反应体系，试了57，59，60，61，63五个退火温度，试了两个引物浓度，20umol和10umol！
自我感觉60的退火温度目的条带更好一些，而10umol的引物浓度比20的更好些，但还是在100bp的位置靠下面还是有尾巴，请问我还需要再试更低的引物浓度吗？有人说是因为引物浓度过大引起下面的小片段处出现的尾巴！我刚开始做，经验不足，希望高手给分析下可能有的问题！！！

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多多交流

3楼2012-06-15 22:58:13

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