24小时热门版块排行榜    

查看: 2203  |  回复: 5

hathaway_

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA条带总是有杂带

别人跑的DNA都是仅有拖尾,而我的有两个问题!
1,是在目的条带前面总会有一片杂背景,应该是是小分子的DNA,各位大侠,请教一下,是不是因为我做的是组织,所以没有别人的细胞什么的那么纯粹,总有其他物质干扰?????
2,目的条带不是很直,如图中间总是有点小尾巴,是为什么?有人说是加样时候的问题,可我改进加样后(尽量抬高一点加样,以免枪头损伤了胶孔),还是有一点问题!请教各位!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

多多交流
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

标题是RNA,里面内容又冒个DNA提取出来...究竟是?
你用什么方法提的?有详细的操作或试剂使用别人才能跟你分析结果啊。
伟大航线....
2楼2012-06-13 09:25:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hathaway_

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2012-06-13 09:25:44
标题是RNA,里面内容又冒个DNA提取出来...究竟是?
你用什么方法提的?有详细的操作或试剂使用别人才能跟你分析结果啊。

题目笔误  呵呵,我用trizol提的RNA,然后反转录成DNA,然后跑条带!
提取过程应该没问题,就是扩增这个体系需要优化,我又跑了梯度PCR,找寻最佳反应体系,试了57,59,60,61,63五个退火温度,试了两个引物浓度,20umol和10umol!
自我感觉60的退火温度目的条带更好一些,而10umol的引物浓度比20的更好些,但还是在100bp的位置靠下面还是有尾巴,请问我还需要再试更低的引物浓度吗?有人说是因为引物浓度过大引起下面的小片段处出现的尾巴!我刚开始做,经验不足,希望高手给分析下可能有的问题!!!
多多交流
3楼2012-06-15 22:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

第二个问题,应该是电泳槽电压不稳定,或跑胶的缓冲液的问题,建议两个都换一下试试
之前我的凹形的,换了缓冲液后就好了
我们的过去,成就了如今的我们,无需悔恨
4楼2012-06-16 11:06:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mungbean3881

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也可能是点样量比较多的原因,有时候减少点样量,条带就不会有拖尾
吃亏未必是祸,占便宜一定不是福
5楼2012-06-16 14:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

是反转录后用cDNA做模板来扩增PCR对吧?
如果PCR产物不特异那就是引物设计方面的问题。可以像你现在这样调整一下退火温度,或再去blast一下。
伟大航线....
6楼2012-06-17 09:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hathaway_ 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-06 02:37 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:31 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 01:20 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-05 23:39 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-05 23:17 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 22:55 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 22:44 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们,看完中央《从严治党》的决定后,对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
请填处理意见