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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hathaway_

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA条带总是有杂带

别人跑的DNA都是仅有拖尾,而我的有两个问题!
1,是在目的条带前面总会有一片杂背景,应该是是小分子的DNA,各位大侠,请教一下,是不是因为我做的是组织,所以没有别人的细胞什么的那么纯粹,总有其他物质干扰?????
2,目的条带不是很直,如图中间总是有点小尾巴,是为什么?有人说是加样时候的问题,可我改进加样后(尽量抬高一点加样,以免枪头损伤了胶孔),还是有一点问题!请教各位!!!
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多多交流
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longrna

新虫 (正式写手)

标题是RNA,里面内容又冒个DNA提取出来...究竟是?
你用什么方法提的?有详细的操作或试剂使用别人才能跟你分析结果啊。
伟大航线....
2楼2012-06-13 09:25:44
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hathaway_

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2012-06-13 09:25:44
标题是RNA,里面内容又冒个DNA提取出来...究竟是?
你用什么方法提的?有详细的操作或试剂使用别人才能跟你分析结果啊。

题目笔误  呵呵,我用trizol提的RNA,然后反转录成DNA,然后跑条带!
提取过程应该没问题,就是扩增这个体系需要优化,我又跑了梯度PCR,找寻最佳反应体系,试了57,59,60,61,63五个退火温度,试了两个引物浓度,20umol和10umol!
自我感觉60的退火温度目的条带更好一些,而10umol的引物浓度比20的更好些,但还是在100bp的位置靠下面还是有尾巴,请问我还需要再试更低的引物浓度吗?有人说是因为引物浓度过大引起下面的小片段处出现的尾巴!我刚开始做,经验不足,希望高手给分析下可能有的问题!!!
多多交流
3楼2012-06-15 22:58:13
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

第二个问题,应该是电泳槽电压不稳定,或跑胶的缓冲液的问题,建议两个都换一下试试
之前我的凹形的,换了缓冲液后就好了
我们的过去,成就了如今的我们,无需悔恨
4楼2012-06-16 11:06:50
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mungbean3881

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也可能是点样量比较多的原因,有时候减少点样量,条带就不会有拖尾
吃亏未必是祸,占便宜一定不是福
5楼2012-06-16 14:56:10
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longrna

新虫 (正式写手)

是反转录后用cDNA做模板来扩增PCR对吧?
如果PCR产物不特异那就是引物设计方面的问题。可以像你现在这样调整一下退火温度,或再去blast一下。
伟大航线....
6楼2012-06-17 09:25:33
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