应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 反转录后扩增有好几条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1576  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

pygao

金虫 (正式写手)

[求助] 反转录后扩增有好几条带

我的RNA质量很好，反转录后扩增；师妹得到所有的目的条带，但我有两对引物扩增的目的条带像Market，有好几条且很明亮。我们用同样的细胞，但处理方式不同，用经过处理的细胞提RNA，做QRT-PCR。谁能告诉我可能的原因？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-24 11:25:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
pygao(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-27 16:41:54
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:32:50
引用回帖:
6楼: Originally posted by pygao at 2013-03-29 11:58:02
是的，引物跨内含子了！
但我测定RNA结果很好，我很郁闷！
RNA中含有DNA扩出来就是两条带吗？我扩出来的像marker，大约有10条带，都挺亮的。...

RNA样品里有DNA的话，引物既可以用反转录出来的cDNA为模板，也可以用基因组DNA为模板。如果引物跨内含子，基因组为模板P出来的带要比cDNA模板P出来的大。如果你P出很多条带，说明引物的特异性有问题或者是退火温度不合适。
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-29 14:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-27 13:35:36
可能是引物特异性问题。此外，你的引物是否跨内含子，RNA反转录前是做了DNase消化？
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-24 11:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pygao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-24 11:43:54
可能是引物特异性问题。此外，你的引物是否跨内含子，RNA反转录前是做了DNase消化？

谢谢！我没有仔细看引物是否跨内含子，也没有做DNase消化，和师妹做的相同，我们用同样的引物，她的是一条带，我的是多条带，是不是RNA中含有DNA啊，我用mini RNase kit提的RNA，她用trizol提取的。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-27 09:49:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:03:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by pygao at 2013-03-27 09:49:20
谢谢！我没有仔细看引物是否跨内含子，也没有做DNase消化，和师妹做的相同，我们用同样的引物，她的是一条带，我的是多条带，是不是RNA中含有DNA啊，我用mini RNase kit提的RNA，她用trizol提取的。...

不管用什么方法提的RNA，反转录前要消化DNA。否则基因组DNA会干扰qPCR。如果引物跨内含子的话，基因组模板P出来的带会与cDNA模板P出的不一样，如果没有跨内含子，两种模板P出同样的带。你的情况很可能是样品里混有基因组DNA，而且引物跨内含子。
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-27 12:25:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +8 cccchenso 2026-03-29 8/400 2026-03-29 23:53 by 我是小康
[考研] 0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分 +5 Shern—- 2026-03-28 5/250 2026-03-29 23:32 by 飞行日记西
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +17 稻妻小编 2026-03-26 17/850 2026-03-29 19:07 by 学员8dgXkO
[基金申请] 面上5B能上会吗？ +4 redcom 2026-03-29 4/200 2026-03-29 17:39 by 最爱编纂辞典
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +14 Mr. Z 2026-03-25 14/700 2026-03-29 17:27 by 学员8dgXkO
[考研] 求收留 +5 1943443204 2026-03-28 5/250 2026-03-29 12:11 by 无际的草原
[考研] 356求调剂 +4 gysy?s?a 2026-03-28 4/200 2026-03-29 10:32 by 唐沐儿
[考研] 调剂考研 +3 王杰一 2026-03-29 3/150 2026-03-29 08:09 by fmesaito
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 一志愿华理，数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 12/600 2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 320分，材料与化工专业，求调剂 +9 一定上岸aaa 2026-03-27 13/650 2026-03-28 15:00 by 神马都不懂
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 一志愿南师大0703化学 275求调剂 +4 Ripcord上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-27 17:00 by zhyzzh
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭