| 查看: 1245 | 回复: 8 | |||
崔t-o-p新虫 (初入文坛)
|
[求助]
紧急求助！220KDa蛋白纯化。。。
|
|
我要做一个细菌完整毒力基因的原核表达，基因全长6087bp，连在PET32a上，测序都正确，且表达为包涵体形式。用普通的镍柱纯化，有杂带也就算了，我纯化下来的目的蛋白仅有一条细细的线。。。根本不能进行后续的试验。 参考其他大家的纯化方法多挂了好几次柱子，咪唑浓度梯度洗脱，效果都不佳，希望大家帮帮忙。。极度崩溃中。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有156人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何分离纯化组蛋白
已经有3人回复
- 纯化蛋白质的过程中核酸去除率的计算
已经有4人回复
- 切胶纯化蛋白，加loadingbuffer跑sds-page没有条带。
已经有12人回复
- 求助！关于GST标签蛋白纯化问题~！
已经有3人回复
- 包涵体复性试剂盒
已经有7人回复
- 求助 膜蛋白纯化 IP
已经有3人回复
- 求助：为什么Ni柱再生后纯化蛋白无活性~~~
已经有8人回复
- 求助！关于GST融合蛋白纯化！楼主愁得一夜没有睡好！
已经有20人回复
- 纯化出的蛋白没有活性，求教！
已经有14人回复
- 蛋白纯化怎么去除核酸
已经有14人回复
- gst标签，蛋白纯化
已经有25人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 【求助/交流】蛋白质分离纯化系统
已经有14人回复
- 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
已经有9人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】纯化后的蛋白浓缩后形成大量沉淀
已经有13人回复
- 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？
已经有19人回复
- 【求助/交流】为何我的蛋白纯化出来后有三条带？
已经有20人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
2楼2013-03-12 09:00:03
3楼2013-03-12 09:15:29
崔t-o-p
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 546
- 散金: 20
- 帖子: 35
- 在线: 110.4小时
- 虫号: 2210186
- 注册: 2012-12-27
- 性别: MM
- 专业: 兽医传染病学
4楼2013-03-12 09:32:48
5楼2013-03-12 09:51:01
生物小通
木虫 (正式写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 1298.3
- 散金: 1069
- 红花: 5
- 帖子: 774
- 在线: 335.3小时
- 虫号: 1537514
- 注册: 2011-12-14
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤复发与转移
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
崔t-o-p: 金币+1, ★有帮助 2013-03-12 10:36:28
感谢参与，应助指数 +1
崔t-o-p: 金币+1, ★有帮助 2013-03-12 10:36:28
|
我不知道你的目的是啥，如果做的与这个蛋白的功能相关建议立马换载体重新构建，在native下纯化。因为就包涵体而言，纯化时很简单的，复性是相对较难的，你现在纯化出来的量就这么少，复性加复性缓冲液，摸索条件等等，你会非常吃力的。 如果你这是想做他的抗体之类的，对他的三维要求弱点，你可以：1.换载体，诱导高表达的包涵体，你载体构建肯定过关了，对你很容易，咨询你的同学老师找个能让目的蛋白表达量高的载体先行构建，以防发现不换载体会严重影响你的后续实验。2.先行裂解细菌，除掉上清，变性溶解包涵体时所加变性液体积降低以增大目的蛋白在溶液中的浓度。3.根据试剂盒上问题提醒或直接咨询他们技术部。4.将洗脱液体积降低，堵住柱子流出端，让洗脱液与胶混匀一段时间充分洗脱后收集。4.洗脱时是有洗脱峰的，用50ul或100ul洗脱/次，然后跑胶查看洗脱峰在哪里（也可以用考马斯亮蓝G-250快速检测），后面大量纯化时只收集洗脱峰处液体，提醒：千万不要让胶干掉！ |
6楼2013-03-12 10:00:37
崔t-o-p
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 546
- 散金: 20
- 帖子: 35
- 在线: 110.4小时
- 虫号: 2210186
- 注册: 2012-12-27
- 性别: MM
- 专业: 兽医传染病学
7楼2013-03-12 10:43:07
崔t-o-p
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 546
- 散金: 20
- 帖子: 35
- 在线: 110.4小时
- 虫号: 2210186
- 注册: 2012-12-27
- 性别: MM
- 专业: 兽医传染病学
8楼2013-03-12 17:03:57
生物小通
木虫 (正式写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 1298.3
- 散金: 1069
- 红花: 5
- 帖子: 774
- 在线: 335.3小时
- 虫号: 1537514
- 注册: 2011-12-14
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤复发与转移
9楼2013-03-12 17:33:21
