应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 紧急求助！220KDa蛋白纯化。。。
51/1返回列表
查看: 1368  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

崔t-o-p

新虫 (初入文坛)

[求助] 紧急求助！220KDa蛋白纯化。。。

我要做一个细菌完整毒力基因的原核表达，基因全长6087bp，连在PET32a上，测序都正确，且表达为包涵体形式。用普通的镍柱纯化，有杂带也就算了，我纯化下来的目的蛋白仅有一条细细的线。。。根本不能进行后续的试验。
     参考其他大家的纯化方法多挂了好几次柱子，咪唑浓度梯度洗脱，效果都不佳，希望大家帮帮忙。。极度崩溃中。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-11 20:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

srwangws

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用包涵体纯化试一下
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-12 09:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
崔t-o-p: 金币+1 2013-03-12 10:20:52
你的表达量高不高，如果表达量不高的话就多搜集点沉淀，溶解后多取一点上柱，只要不超过载量就行，循环反复几次试试，只有挂柱上的蛋白多，你洗下来的量才多1
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-12 09:00:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔t-o-p

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-12 09:00:03
你的表达量高不高，如果表达量不高的话就多搜集点沉淀，溶解后多取一点上柱，只要不超过载量就行，循环反复几次试试，只有挂柱上的蛋白多，你洗下来的量才多1

表达量不是很高，我摇了1L菌。我用的是康为世纪的包涵体纯化试剂盒，在包涵体溶解后，要过滤膜的过程中，我的很快就虑好了。。就是说明溶解的确实不多，但是都没有挂上，全在流穿液里了。
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-12 09:32:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
崔t-o-p: 金币+1 2013-03-12 10:20:35
引用回帖:
4楼: Originally posted by 崔t-o-p at 2013-03-12 09:32:48
表达量不是很高，我摇了1L菌。我用的是康为世纪的包涵体纯化试剂盒，在包涵体溶解后，要过滤膜的过程中，我的很快就虑好了。。就是说明溶解的确实不多，但是都没有挂上，全在流穿液里了。...

你用的比较高级啊，我当时还是自己做的柱子！如果溶解的蛋白不多的话可以试试超滤，浓缩一下，跑个蛋白胶看看，再上柱，不管怎么说就是要想方设法的把目的蛋白尽可能多的挂到柱子上，只有这样才能收的多。
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-12 09:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 帮忙看看fileCode +4 wwncly 2026-08-10 8/400 2026-08-10 22:07 by demonstreets
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭