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chen112323

铜虫 (初入文坛)

[求助] 切胶纯化蛋白,加loadingbuffer跑sds-page没有条带。 已有1人参与

6块胶切下来的蛋白条带放在透析袋里,加了10ml 1xTris-Glys,在加了 1xTris-Glys水平电泳仪里跑了2小时,横向跑的,跑透明了,胶上还有些浅浅的条带。放在pbs透析过夜了。之后呈絮状,测浓度将近1mg/ml。纯化后的蛋白加Loading buffer混匀就上样了,没有煮。跑SDS-PAGE没有条带。这是为什么,虚心请教。
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chen112323

铜虫 (初入文坛)

自己顶一顶
2楼2013-10-20 12:24:11
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chen112323

铜虫 (初入文坛)

求回复
3楼2013-10-20 12:24:26
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chen112323

铜虫 (初入文坛)

求指教
4楼2013-10-20 12:24:44
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chen112323

铜虫 (初入文坛)

5楼2013-10-20 12:24:58
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chen112323

铜虫 (初入文坛)

6楼2013-10-20 12:25:10
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xiangxiang07

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chen112323: 金币+3, 有帮助 2013-10-20 20:58:46
可能纯化出来的蛋白变性沉淀了,没有跑进胶里去,你浓缩胶上样空的那地方染色有蓝色的带么
7楼2013-10-20 19:37:23
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chen112323

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiangxiang07 at 2013-10-20 19:37:23
可能纯化出来的蛋白变性沉淀了,没有跑进胶里去,你浓缩胶上样空的那地方染色有蓝色的带么

感谢回复!没有条带,我没有浓缩的还。我跑水平的时候没有反向跑,透析的时候没有完全排除空气,其他都正常的感觉,不知道为什么?变形沉淀之后怎么转变为可溶?
8楼2013-10-20 20:58:03
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chen112323

铜虫 (初入文坛)

顶一顶
9楼2013-10-21 11:11:56
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danchai

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chen112323: 金币+3, 有帮助 2013-10-27 19:46:56
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-27 22:15:37
首先保证切下来的胶含有目的条带,我是切一竖条染色,对应切的胶,胶回收用的是水平电泳槽,缓冲液50mmTris-HCl+1MMEDTA pH8.0,透析袋中加2-4ml缓冲液,跑胶30min,之后浓缩电泳可以看到条带
10楼2013-10-21 11:56:12
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