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1989zb

金虫 (小有名气)

[求助] pcr目的条带暗,怎么办呢??

最近一直pcr,可是目的条带总是很暗,该怎么优化条件呢?而且在胶回收后用同样的条件跑,连条带都没有,目的片段大小1500bp
反应条件:94度 4min 94度 30s  52度30s  72 度 90s  72度10min  
该怎么优化呢??

未命名.jpg



胶回收稀释后pcr.jpg
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1989zb

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-03-11 10:07:35
杂带比较多,可以升高退火温度,比如做个touchdown PCR,或者梯度PCR,找到最适退火温度,再PCR!

怎么才能让条带更亮呢
3楼2013-03-11 10:44:30
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1989zb: 金币+1 2013-03-13 07:48:18
杂带比较多,可以升高退火温度,比如做个touchdown PCR,或者梯度PCR,找到最适退火温度,再PCR!
寻找真正的自我!
2楼2013-03-11 10:07:35
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无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1989zb at 2013-03-11 10:44:30
怎么才能让条带更亮呢...

第一次做体系大一点,切目的条带,回收,以回收产物为模板再P,再结合优化PCR条件因该会好些!
4楼2013-03-11 10:51:44
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1989zb

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-11 10:51:44
第一次做体系大一点,切目的条带,回收,以回收产物为模板再P,再结合优化PCR条件因该会好些!...

第二张图片就是胶回收在p  的 结果什么都没p 出来  不管是用胶回收原液或者稀释的都没p出来 郁闷的很
浓度不够没办法测序这才真郁闷了。
5楼2013-03-11 11:01:11
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