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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

[求助] 一直都能PCR出来的产物,怎么重复不出来了

原来一直能P出来的产物,怎么也扩不出来了,到底是什么原因,buffer dntp 这些都没问题啊,体系也没变,到底是什么原因?
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learningying

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-03-11 09:28:50
怎么没人回复呢?更棘手的问题来了 现在pcr阳性,但酶切总是阴性结果,阴阳对照成立,鉴定的是TA克隆的单克。做了半年了总是有各种问题,快要做死在酶切连接上了,求大神给点建议!!

浓度之比是十分重要的。强调下:这里所说的浓度比是指摩尔浓度之比,一般片段和载体的摩尔浓度之比为6:1的时候基本上一下子就做出来了。(碱基之比就是分子量之比,直接计算摩尔浓度之比。)我也是在这里困了2个月,后来就做出来了。
加油,天道酬勤
12楼2014-10-27 19:57:33
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