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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一直都能PCR出来的产物，怎么重复不出来了
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

[求助] 一直都能PCR出来的产物，怎么重复不出来了

原来一直能P出来的产物，怎么也扩不出来了，到底是什么原因，buffer dntp 这些都没问题啊，体系也没变，到底是什么原因？
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1楼2013-03-04 11:45:46
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learningying

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-03-11 09:28:50
怎么没人回复呢？更棘手的问题来了 现在pcr阳性，但酶切总是阴性结果，阴阳对照成立，鉴定的是TA克隆的单克。做了半年了总是有各种问题，快要做死在酶切连接上了，求大神给点建议！！

浓度之比是十分重要的。强调下：这里所说的浓度比是指摩尔浓度之比，一般片段和载体的摩尔浓度之比为6:1的时候基本上一下子就做出来了。（碱基之比就是分子量之比，直接计算摩尔浓度之比。）我也是在这里困了2个月，后来就做出来了。
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加油，天道酬勤
12楼2014-10-27 19:57:33
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qiuhengtong

新虫 (初入文坛)
模板或PCR仪的问题，多加点模板再做一个温度梯度PCR，应该能出来的吧。
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2楼2013-03-04 12:25:25
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看看是不是管子和枪头的问题
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3楼2013-03-04 13:06:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-04 13:34:01
一般是模板的问题。基因组DNA这类大分子经多次冻融后质量会变差很多。一般适当多加一些模板应该可以P出来的。
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4楼2013-03-04 13:19:50
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查看全部 12 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
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