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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一直都能PCR出来的产物，怎么重复不出来了
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

[求助] 一直都能PCR出来的产物，怎么重复不出来了

原来一直能P出来的产物，怎么也扩不出来了，到底是什么原因，buffer dntp 这些都没问题啊，体系也没变，到底是什么原因？
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1楼2013-03-04 11:45:46
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回帖置顶 ( 共有1个 )

囧囧俏

铁虫 (小有名气)
囧囧俏: 回帖置顶 2013-03-13 11:35:42
怎么没人回复呢？更棘手的问题来了 现在pcr阳性，但酶切总是阴性结果，阴阳对照成立，鉴定的是TA克隆的单克。做了半年了总是有各种问题，快要做死在酶切连接上了，求大神给点建议！！
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9楼2013-03-11 09:28:50
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普通回帖

qiuhengtong

新虫 (初入文坛)
模板或PCR仪的问题，多加点模板再做一个温度梯度PCR，应该能出来的吧。
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2楼2013-03-04 12:25:25
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看看是不是管子和枪头的问题
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3楼2013-03-04 13:06:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-04 13:34:01
一般是模板的问题。基因组DNA这类大分子经多次冻融后质量会变差很多。一般适当多加一些模板应该可以P出来的。
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4楼2013-03-04 13:19:50
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haitian0625

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可同时做模板批次、不同机器的对照看看。
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5楼2013-03-04 21:34:47
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
谢谢各位同学，你们说的这些问题已经排查，但还是P不出来，引物已经用了半年了一直很稳定，突然变成这样，感觉很诡异，到底是什么原因呢？
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6楼2013-03-06 10:38:58
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总会遇到这种灵异事件。。。。
总被困扰

按说PCR重复性应该很好地。。。
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7楼2013-03-06 11:55:55
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cdl007 at 2013-03-06 11:55:55
总会遇到这种灵异事件。。。。
总被困扰

按说PCR重复性应该很好地。。。

8楼2013-03-06 14:50:27
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2013-04-18 20:56:07
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