24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 990  |  回复: 9

zhouzejun202

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切为什么总是涂抹带?

各位,双酶切时总是涂抹带,或者干脆什么带都没有。marker没有问题,酶用的是NEB的EcoRI和XhoI,各加1.5uL,50uL体系,质粒加了30uL。是酶过期了?质粒浓度的问题还是酶加多了?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxb-abc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你把琼脂糖图片发上来看看
2楼2012-04-13 17:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqchlorella

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-13 18:36:27
zhouzejun202: 金币+5, 有帮助, 谢谢 2012-04-13 19:17:39
我觉得你首先检测下质粒质量和浓度,然后注意下酶切时间,质粒没问题的话有可能切的时间太长了。
供参考,祝成功!
风一样的汉子
3楼2012-04-13 18:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brobin

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得正常,因为不同的酶切的位点不同,切的不完全剩下的长度不同。
4楼2012-04-13 18:44:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouzejun202

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hqchlorella at 2012-04-13 18:06:41:
我觉得你首先检测下质粒质量和浓度,然后注意下酶切时间,质粒没问题的话有可能切的时间太长了。
供参考,祝成功!

质粒质量和浓度没有问题,切的是三小时啊!
5楼2012-04-13 19:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhouzejun202: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-13 19:22:30
小丹木木: 金币+2, 专家考核 2012-04-14 13:39:38
所谓的涂抹带就是酶切酶切干净,按照你说的体系,酶应该是那个量,但是质粒加太多了。。。
50ul体系你添加30ul也太多了,加10几ul足矣。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2012-04-13 19:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouzejun202

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by brobin at 2012-04-13 18:44:24:
我觉得正常,因为不同的酶切的位点不同,切的不完全剩下的长度不同。

不懂
7楼2012-04-13 19:20:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouzejun202

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 天使托 at 2012-04-13 19:19:35:
所谓的涂抹带就是酶切酶切干净,按照你说的体系,酶应该是那个量,但是质粒加太多了。。。
50ul体系你添加30ul也太多了,加10几ul足矣。。。

恩,我再试试。
8楼2012-04-13 19:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhouzejun202: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 好的 2012-04-14 10:10:59
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 辛苦 2012-04-14 13:40:02
建议在酶切前对质粒的浓度进行测定,然后可以根据需要,确定酶切时的质粒用量。一般一个简单的克隆,酶切1-2ug质粒就足够了。
切的质粒多,就需要加更多的酶才能保证质粒的完全酶切,而完全酶切是克隆成功的前提。
9楼2012-04-13 23:22:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得还是质粒的质量可能有问题。有时候,质粒电泳没问题,酶切后问题就出来了!重新挑个克隆试试吧!
10楼2012-04-14 12:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhouzejun202 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 334求调剂 +5 曾仰之 2026-04-03 5/250 2026-04-03 10:13 by jp9609
[考研] 316求调剂 +13 舟自梗 2026-04-01 17/850 2026-04-03 09:20 by zhouxiaoyu
[考研] 315求调剂 +11 小羊小羊_ 2026-04-02 11/550 2026-04-02 21:57 by wwytracy
[考研] 349求调剂 +10 zwjjjjjj 2026-03-31 10/500 2026-04-02 20:13 by dongzh2009
[考研] 275学硕081000服从调剂到其他专业,保不住本专业了 +7 一只小小水牛 2026-04-02 8/400 2026-04-02 14:23 by alice-2022
[考研] 292分,材料与化工,申请调剂 +19 程晴之 2026-04-01 23/1150 2026-04-02 11:59 by 程晴之
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 考研调剂0702 +3 梅子味晚霞 2026-03-28 3/150 2026-04-02 10:10 by jp9609
[考研] 354求调剂 +4 lxb598 2026-03-31 5/250 2026-04-02 09:55 by Jaylen.
[考研] 求调剂0703 +5 周嘉尧 2026-03-31 8/400 2026-04-01 20:32 by ltltkkk
[考研] 291求调剂 +3 迷蒙木木 2026-04-01 4/200 2026-04-01 11:07 by 逆水乘风
[考研] 生物学296求调剂 +10 汤圆包 2026-03-29 14/700 2026-04-01 10:44 by 求调剂zz
[考研] 求0861交通运输专硕or材料专硕调剂 +4 勒布朗@ 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:54 by 一只好果子?
[考研] 301求调剂 +8 axibli 2026-04-01 8/400 2026-04-01 09:51 by 我的船我的海
[考研] 289求调剂 +7 BrightLL 2026-03-29 7/350 2026-03-31 22:05 by 544594351
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 麦恩莉. 2026-03-30 4/200 2026-03-31 14:35 by 记事本2026
[考博] 材料专业申博 +5 杜雨婷dyt 2026-03-29 5/250 2026-03-31 11:19 by oooqiao
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 283求调剂(080500) +14 A child 2026-03-27 14/700 2026-03-30 12:06 by 探123
信息提示
请填处理意见