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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切为什么总是涂抹带？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhouzejun202

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切为什么总是涂抹带？

各位，双酶切时总是涂抹带，或者干脆什么带都没有。marker没有问题，酶用的是NEB的EcoRI和XhoI，各加1.5uL，50uL体系，质粒加了30uL。是酶过期了？质粒浓度的问题还是酶加多了？
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1楼 2012-04-13 12:18:27
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cxb-abc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你把琼脂糖图片发上来看看
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2楼2012-04-13 17:14:23
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hqchlorella

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-13 18:36:27
zhouzejun202: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2012-04-13 19:17:39
我觉得你首先检测下质粒质量和浓度，然后注意下酶切时间，质粒没问题的话有可能切的时间太长了。
供参考，祝成功！
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风一样的汉子
3楼2012-04-13 18:06:41
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brobin

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得正常，因为不同的酶切的位点不同，切的不完全剩下的长度不同。
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4楼2012-04-13 18:44:24
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zhouzejun202

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hqchlorella at 2012-04-13 18:06:41:
我觉得你首先检测下质粒质量和浓度，然后注意下酶切时间，质粒没问题的话有可能切的时间太长了。
供参考，祝成功！

质粒质量和浓度没有问题，切的是三小时啊！
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5楼2012-04-13 19:18:18
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhouzejun202: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-13 19:22:30
小丹木木: 金币+2, 专家考核 2012-04-14 13:39:38
所谓的涂抹带就是酶切酶切干净，按照你说的体系，酶应该是那个量，但是质粒加太多了。。。
50ul体系你添加30ul也太多了，加10几ul足矣。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2012-04-13 19:19:35
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zhouzejun202

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by brobin at 2012-04-13 18:44:24:
我觉得正常，因为不同的酶切的位点不同，切的不完全剩下的长度不同。

不懂
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7楼2012-04-13 19:20:18
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zhouzejun202

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 天使托 at 2012-04-13 19:19:35:
所谓的涂抹带就是酶切酶切干净，按照你说的体系，酶应该是那个量，但是质粒加太多了。。。
50ul体系你添加30ul也太多了，加10几ul足矣。。。

恩，我再试试。
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8楼2012-04-13 19:23:56
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhouzejun202: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 好的 2012-04-14 10:10:59
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 辛苦 2012-04-14 13:40:02
建议在酶切前对质粒的浓度进行测定，然后可以根据需要，确定酶切时的质粒用量。一般一个简单的克隆，酶切1-2ug质粒就足够了。
切的质粒多，就需要加更多的酶才能保证质粒的完全酶切，而完全酶切是克隆成功的前提。
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9楼2012-04-13 23:22:29
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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得还是质粒的质量可能有问题。有时候，质粒电泳没问题，酶切后问题就出来了！重新挑个克隆试试吧！
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10楼2012-04-14 12:52:01
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