| 查看: 4139 | 回复: 18 | ||
[求助]
毕赤酵母表达出蛋白但没有活性
|
|
各位大虾，小妹最近用毕赤酵母KM71和GS115表达一个水解酶，该酶在原始菌中是分泌表达的。我利用的是pPIC9K质粒，构建的质粒电转进两个宿主，取空的pPIC9K质粒电转酵母细胞作为阴性对照。另外在涂板的时候我把制备的感受态细胞也涂了MD板，没有长出来，感受态应该是没有问题。我是直接用1mg/ml的G418 MD板进行筛选阳性菌落，，过了48小时左右长出菌落，是白色的，形态也很像酵母。将这些菌落接入含有1mg/ml的G418 MD液体培养基，提取基因组用通用引物AOX3'、AOX5'和自己的特异性引物进行PCR都扩出了条带，大小也和目的基因大小相当。之后接种到BMGY培养基，过夜培养后转接到BMMY培养基，每天补加甲醇至终浓度为1%，之后每天取样测酶活，第6天的时候取上清液进行SDS-PAGE检测，有表达条带，大小也和预测的目的蛋白大小相当。但就是没有活性。做了80%硫酸铵沉淀，仍然没有活性。 最近老板催的紧，压力很大。请各位帮我分析分析，我的操作有没有什么问题，大恩不言谢  |
回复此楼» 猜你喜欢
085801电气专硕272求调剂
已经有22人回复
-
求计算机方向调剂
已经有6人回复
-
湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息
已经有3人回复
-
通信工程求调剂！！！
已经有7人回复
-
26药学专硕105500求调剂
已经有8人回复
-
297，工科调剂?
已经有11人回复
-
申博自荐
已经有4人回复
-
294求调剂
已经有9人回复
-
289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校)
已经有5人回复
-
291求调剂
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白成功表达，却没有活性，换个表达系统有必要吗？
已经有7人回复
- 毕赤酵母表达重组蛋白遇到大难题
已经有20人回复
- 重组大肠杆菌表达蛋白可溶，但无活性
已经有15人回复
- 重组蛋白活性消失。。。
已经有3人回复
- 毕赤酵母表达后的蛋白浓缩
已经有5人回复
- 毕赤酵母表达时的杂蛋白问题
已经有16人回复
- 外源蛋白在毕赤酵母中不表达
已经有18人回复
- 重组酵母表达了，但是蛋白没有了活力是什么原因
已经有5人回复
- 毕赤酵母表达蛋白纯化
已经有10人回复
- 毕赤酵母表达培养基
已经有4人回复
- 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
已经有17人回复
- 问个关于毕赤酵母接种的问题
已经有8人回复
- 表达蛋白折叠不正确会有活性麽？
已经有15人回复
- 毕赤酵母表达一直不表达
已经有13人回复
- 毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀
已经有10人回复
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 关于毕赤酵母表达
已经有22人回复
- 有关毕赤酵母的平板筛选
已经有11人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？
已经有20人回复
- 酵母表达，为什么表达不出来？
已经有5人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母表达胞外蛋白，sds电泳后看不到条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】有人用过毕赤酵母GS115吗？
已经有15人回复
- 【求助/交流】请问毕赤酵母胞外胞外表达有酶活不蛋白，正常吗？
已经有8人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母表达蛋白的奇怪现象
已经有7人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母表达无活性
已经有8人回复
- 【求助/交流】推荐酿酒酵母、毕赤酵母胞内表达质粒
已经有10人回复
2楼2011-09-07 09:27:18
3楼2011-09-07 16:40:00
dhmdddd
木虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 3930.1
- 散金: 939
- 红花: 3
- 帖子: 815
- 在线: 561.1小时
- 虫号: 839789
- 注册: 2009-09-03
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2011-09-07 17:00:07
5楼2011-09-10 19:03:09
phoenixcc
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1241.8
- 帖子: 195
- 在线: 17.7小时
- 虫号: 283709
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2011-09-10 19:35:13
7楼2011-09-11 13:12:13
8楼2011-09-11 22:10:13
9楼2011-09-11 22:10:42
phoenixcc
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1241.8
- 帖子: 195
- 在线: 17.7小时
- 虫号: 283709
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
10楼2011-09-11 23:17:11
20