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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 问个关于毕赤酵母接种的问题
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sulakitty

新虫 (小有名气)

[交流] 问个关于毕赤酵母接种的问题 已有5人参与

毕赤酵母表达开始时，手册上说是直接在BMGY中接入单菌落，长到OD2-6时，换BMMY，我想问，如果不直接接单菌落，而是接由单菌落过夜培养的菌液，按1%的接种量接入，这两种接种方法对蛋白的表达有影响吗？
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1楼 2012-10-17 20:33:32
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amaoni

木虫 (小有名气)
期待中
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2楼2012-10-18 09:26:53
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没什么问题啊，你这个只是相当于1级种子 二级种子的问题，只要OD差不多，没什么大问题，说不定你的菌种活化的比较好还会长得更好。
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3楼2012-10-19 08:42:08
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reallpf

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
两种方法没有很大的区别。重点在于你最后接种到BMMY里面的菌液是否是出去稳定期的菌，这个时候菌落特性和表达最温度，效果会比较好。
但是对于毕赤酵母的摇瓶发酵表达，种子到不是最重要的。重要的是甲醇诱导的时间和量，这个要经过多次发酵，设置对照探索得出。另外一个重要的问题就是溶氧的问题，溶氧对毕赤酵母的生长非常重要，可以使用挡板摇瓶进行摇瓶发酵，提高溶氧值。但是特殊情况不同结果，溶氧最大的还是影响生长，与表达量不是正比关系，但生长的好表达量肯定会高。
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4楼2012-10-19 09:31:44
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sulakitty

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 08:42:08
没什么问题啊，你这个只是相当于1级种子 二级种子的问题，只要OD差不多，没什么大问题，说不定你的菌种活化的比较好还会长得更好。

谢谢!
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5楼2012-10-19 15:27:45
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sulakitty

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by reallpf at 2012-10-19 09:31:44
两种方法没有很大的区别。重点在于你最后接种到BMMY里面的菌液是否是出去稳定期的菌，这个时候菌落特性和表达最温度，效果会比较好。
但是对于毕赤酵母的摇瓶发酵表达，种子到不是最重要的。重要的是甲醇诱导的时间 ...

十分感谢！另外问下如果用那个挡板摇瓶的话，转速需要多少啊？还是250-300rpm吗
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6楼2012-10-19 15:38:58
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reallpf

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by sulakitty at 2012-10-19 15:38:58
十分感谢！另外问下如果用那个挡板摇瓶的话，转速需要多少啊？还是250-300rpm吗...

转速没有特别要求，和普通摇瓶一样即可。
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7楼2012-10-20 14:04:54
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)
★
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7楼: Originally posted by reallpf at 2012-10-20 14:04:54
转速没有特别要求，和普通摇瓶一样即可。...

貌似是需要250rpm左右的，这样的效果不错
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一花一世界、一叶一菩提
8楼2013-04-20 23:02:30
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山高水远

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
影响不大，只要你的菌液没有杂菌就行。个人认为挑单菌落接种，只是保证所接的菌种是单一菌种而已。
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9楼2015-04-17 09:53:42
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