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sulakitty

新虫 (小有名气)

[交流] 问个关于毕赤酵母接种的问题 已有5人参与

毕赤酵母表达开始时,手册上说是直接在BMGY中接入单菌落,长到OD2-6时,换BMMY,我想问,如果不直接接单菌落,而是接由单菌落过夜培养的菌液,按1%的接种量接入,这两种接种方法对蛋白的表达有影响吗?
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amaoni

木虫 (小有名气)

期待中
2楼2012-10-18 09:26:53
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没什么问题啊,你这个只是相当于1级种子 二级种子的问题,只要OD差不多,没什么大问题,说不定你的菌种活化的比较好还会长得更好。
3楼2012-10-19 08:42:08
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reallpf

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
两种方法没有很大的区别。重点在于你最后接种到BMMY里面的菌液是否是出去稳定期的菌,这个时候菌落特性和表达最温度,效果会比较好。
但是对于毕赤酵母的摇瓶发酵表达,种子到不是最重要的。重要的是甲醇诱导的时间和量,这个要经过多次发酵,设置对照探索得出。另外一个重要的问题就是溶氧的问题,溶氧对毕赤酵母的生长非常重要,可以使用挡板摇瓶进行摇瓶发酵,提高溶氧值。但是特殊情况不同结果,溶氧最大的还是影响生长,与表达量不是正比关系,但生长的好表达量肯定会高。
4楼2012-10-19 09:31:44
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sulakitty

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 08:42:08
没什么问题啊,你这个只是相当于1级种子 二级种子的问题,只要OD差不多,没什么大问题,说不定你的菌种活化的比较好还会长得更好。

谢谢!
5楼2012-10-19 15:27:45
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sulakitty

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by reallpf at 2012-10-19 09:31:44
两种方法没有很大的区别。重点在于你最后接种到BMMY里面的菌液是否是出去稳定期的菌,这个时候菌落特性和表达最温度,效果会比较好。
但是对于毕赤酵母的摇瓶发酵表达,种子到不是最重要的。重要的是甲醇诱导的时间 ...

十分感谢!另外问下如果用那个挡板摇瓶的话,转速需要多少啊?还是250-300rpm吗
6楼2012-10-19 15:38:58
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reallpf

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by sulakitty at 2012-10-19 15:38:58
十分感谢!另外问下如果用那个挡板摇瓶的话,转速需要多少啊?还是250-300rpm吗...

转速没有特别要求,和普通摇瓶一样即可。
7楼2012-10-20 14:04:54
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by reallpf at 2012-10-20 14:04:54
转速没有特别要求,和普通摇瓶一样即可。...

貌似是需要250rpm左右的,这样的效果不错
一花一世界、一叶一菩提
8楼2013-04-20 23:02:30
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山高水远

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
影响不大,只要你的菌液没有杂菌就行。个人认为挑单菌落接种,只是保证所接的菌种是单一菌种而已。
9楼2015-04-17 09:53:42
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