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pidou213

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白质表达随时间变化 操作

做毕赤酵母表达,老板非要做一个蛋白质表达随时间变化 的操作,来证明毕赤酵母是否真正表达,请问大家一般怎么证明是否表达???
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-20 23:09:20
pidou213(金币+3): 2011-08-06 14:10:52
毕赤酵母是否表达了蛋白质?还有不表达的?多半是表达量高低的问题。先按照文献上的说法来做一次,假如真的那么不好运,检测不到想要的蛋白质,那就接种量、诱导时间、温度和诱导剂量都要做梯度才行了,优化了这四项之后,蛋白质产量应该会提高的,主要是后三项影响较大。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-04-20 22:44:39
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-04-21 08:50:57
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-04-20 22:04:14:
做毕赤酵母表达,老板非要做一个蛋白质表达随时间变化 的操作,来证明毕赤酵母是否真正表达,请问大家一般怎么证明是否表达???

定时取样,加marker和未诱导的工程菌或带空载体的毕赤酵母做对照,SDS-PAGE分析。
3楼2011-04-21 07:46:53
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pidou213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-20 22:44:39:
毕赤酵母是否表达了蛋白质?还有不表达的?多半是表达量高低的问题。先按照文献上的说法来做一次,假如真的那么不好运,检测不到想要的蛋白质,那就接种量、诱导时间、温度和诱导剂量都要做梯度才行了,优化了这四 ...

你好,我想说:我想问检测手段,不是如何表达
见得多爱的多
4楼2011-04-21 12:52:53
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pidou213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-04-21 07:46:53:
定时取样,加marker和未诱导的工程菌或带空载体的毕赤酵母做对照,SDS-PAGE分析。

我不能不说,你说了 和没说没有什么区别
见得多爱的多
5楼2011-04-21 12:53:23
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-04-21 12:53:23:
我不能不说,你说了 和没说没有什么区别

你让个学基因工程的看看,就知道我说了和没说有什么区别
6楼2011-04-21 13:31:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

试一下bloting,或是抗体
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-04-21 15:45:15
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pidou213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-04-21 13:31:56:
你让个学基因工程的看看,就知道我说了和没说有什么区别

定时取样,加marker和未诱导的工程菌或带空载体的毕赤酵母做对照,SDS-PAGE分析

你说的很对,但是和我的问题貌似不符啊
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8楼2011-04-21 18:14:53
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-04-21 07:46:53
定时取样,加marker和未诱导的工程菌或带空载体的毕赤酵母做对照,SDS-PAGE分析。...

可毕赤酵母会有糖基化现象,我现在做的就是糖基化,产量能有300mg/L.老板说还要优化下,空载的毕赤酵母做了,基本是零……不知道怎么样才比较好
一花一世界、一叶一菩提
9楼2013-04-20 23:00:00
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