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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质表达随时间变化 操作
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pidou213

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白质表达随时间变化 操作

做毕赤酵母表达，老板非要做一个蛋白质表达随时间变化 的操作，来证明毕赤酵母是否真正表达，请问大家一般怎么证明是否表达？？？
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见得多爱的多
1楼 2011-04-20 22:04:14
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-20 23:09:20
pidou213(金币+3): 2011-08-06 14:10:52
毕赤酵母是否表达了蛋白质？还有不表达的？多半是表达量高低的问题。先按照文献上的说法来做一次，假如真的那么不好运，检测不到想要的蛋白质，那就接种量、诱导时间、温度和诱导剂量都要做梯度才行了，优化了这四项之后，蛋白质产量应该会提高的，主要是后三项影响较大。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-04-20 22:44:39
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-04-21 08:50:57
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Originally posted by pidou213 at 2011-04-20 22:04:14:
做毕赤酵母表达，老板非要做一个蛋白质表达随时间变化 的操作，来证明毕赤酵母是否真正表达，请问大家一般怎么证明是否表达？？？

定时取样，加marker和未诱导的工程菌或带空载体的毕赤酵母做对照，SDS-PAGE分析。
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3楼2011-04-21 07:46:53
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-20 22:44:39:
毕赤酵母是否表达了蛋白质？还有不表达的？多半是表达量高低的问题。先按照文献上的说法来做一次，假如真的那么不好运，检测不到想要的蛋白质，那就接种量、诱导时间、温度和诱导剂量都要做梯度才行了，优化了这四 ...

你好，我想说：我想问检测手段，不是如何表达
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见得多爱的多
4楼2011-04-21 12:52:53
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-04-21 07:46:53:
定时取样，加marker和未诱导的工程菌或带空载体的毕赤酵母做对照，SDS-PAGE分析。

我不能不说，你说了 和没说没有什么区别
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见得多爱的多
5楼2011-04-21 12:53:23
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-04-21 12:53:23:
我不能不说，你说了 和没说没有什么区别

你让个学基因工程的看看，就知道我说了和没说有什么区别
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6楼2011-04-21 13:31:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
试一下bloting，或是抗体
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-04-21 15:45:15
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-04-21 13:31:56:
你让个学基因工程的看看，就知道我说了和没说有什么区别

定时取样，加marker和未诱导的工程菌或带空载体的毕赤酵母做对照，SDS-PAGE分析

你说的很对，但是和我的问题貌似不符啊
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见得多爱的多
8楼2011-04-21 18:14:53
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-04-21 07:46:53
定时取样，加marker和未诱导的工程菌或带空载体的毕赤酵母做对照，SDS-PAGE分析。...

可毕赤酵母会有糖基化现象，我现在做的就是糖基化，产量能有300mg/L.老板说还要优化下，空载的毕赤酵母做了，基本是零……不知道怎么样才比较好
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一花一世界、一叶一菩提
9楼2013-04-20 23:00:00
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