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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白沉淀后不能复溶~！
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huangxinqi20

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白沉淀后不能复溶~！

想提取一株短小芽孢杆菌产生的活性蛋白，发酵液中加入硫酸铵使其沉淀，蛋白沉淀加入PBS不能溶解，然后在PBS中透析，透析完了蛋白还是不能复溶，呈胶体状，我试了加NaOH调节ph到12左右才可以使蛋白溶解。但又怕蛋白变性，想问问大家有没有其他办法使其溶解，不然不好上柱分离啊。
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1楼 2011-07-10 13:58:04
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2): Good 2011-07-10 21:44:37
硫酸铵沉淀的梯度有没有摸索？不会早就失活了吧？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-10 18:51:41
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huangxinqi20

铜虫 (初入文坛)
dhd997: 把信息汇总在一楼吧。可以编辑的。 2011-07-11 07:48:44
做了梯度，30%以下没活性，30%-60%的沉淀检测有活性，所以应该没有失活。
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3楼2011-07-10 23:25:43
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雨中的雕塑

银虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-07-11 07:49:04
内容已删除
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我愿天下人：人人得以智慧之光，去开启生命之真谛
4楼2011-07-11 07:28:33
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smisuccess

金虫 (小有名气)
引用回帖:
80285楼: Originally posted by huangxinqi20 at 2011-07-10 13:58:04:
想提取一株短小芽孢杆菌产生的活性蛋白，发酵液中加入硫酸铵使其沉淀，蛋白沉淀加入PBS不能溶解，然后在PBS中透析，透析完了蛋白还是不能复溶，呈胶体状，我试了加NaOH调节ph到12左右才可以使蛋白溶解。但又怕蛋白 ...

请问楼主你的蛋白最后溶解了吗，我现在也在做有关蛋白的，也遇到了跟你一样的情况？
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5楼2012-04-26 16:01:14
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沧海飞雪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是用的硫酸铵沉淀法，沉淀完了想过HPLC分离，但是不知道用什么溶剂能即复溶又适合过柱子！请问楼主的问题是怎么解决的？求帮助！
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6楼2012-10-18 10:21:50
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沧海飞雪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
95525楼: Originally posted by 雨中的雕塑 at 2011-07-11 07:28:33
加NaOH到12很有可能变性、加的硫酸胺浓度可能不够！沉淀不完全！

我也是用的硫酸铵沉淀法，沉淀完了想过HPLC分离，但是不知道用什么溶剂能即复溶又适合过柱子！求帮助！
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7楼2012-10-18 10:24:22
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沧海飞雪

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
1608176楼: Originally posted by smisuccess at 2012-04-26 16:01:14
请问楼主你的蛋白最后溶解了吗，我现在也在做有关蛋白的，也遇到了跟你一样的情况？...

我也是用的硫酸铵沉淀法，沉淀完了想过HPLC分离，但是不知道用什么溶剂能即复溶又适合过柱子！求帮助！
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8楼2012-10-18 10:24:51
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