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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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chyqiu

木虫 (著名写手)

[求助] 蛋白放置一段时间后出现沉淀的问题

脂多糖与蛋白结合后,经纯化后放在2-8℃几天后出沉淀的原因。请高手指点迷津。谢谢!
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wushm388

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-24 07:07:29
(1)你的蛋白溶液是无菌的吗?若未除菌的话是回染菌导致沉淀。
(2)蛋白在4度长期放置会聚集(aggregation)或被氧化导致沉淀,可尝试加入蛋白稳定剂和抗氧化剂。
(3)改变蛋白贮藏条件。
4楼2013-04-23 14:12:42
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普通回帖

chyqiu

木虫 (著名写手)

太好了
2楼2013-04-23 10:29:16
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256k

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-24 07:06:54
lz自己顶贴????  应该是不稳定变性了,分离出来跑跑胶看看就确切了。
3楼2013-04-23 12:23:50
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chyqiu

木虫 (著名写手)

我的蛋白单独放置不会出现沉淀,是与多糖共价结合以后,经凝胶柱纯化,除菌过滤后保存于4℃,但放置几天后就慢慢的出现沉淀了。请问加什么稳定剂比较好,试过加1%的甘油,但还是出现沉淀?
5楼2013-04-23 15:53:39
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

自己顶帖子  哈哈哈哈哈哈哈哈哈
6楼2013-04-25 10:31:37
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帐篷灯

铁虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢参与,不过回帖更倾向于交流,而不是应助 2013-04-27 08:22:26
引用回帖:
5楼: Originally posted by chyqiu at 2013-04-23 15:53:39
我的蛋白单独放置不会出现沉淀,是与多糖共价结合以后,经凝胶柱纯化,除菌过滤后保存于4℃,但放置几天后就慢慢的出现沉淀了。请问加什么稳定剂比较好,试过加1%的甘油,但还是出现沉淀?

你的buffer提醒能告知一下?还有蛋白的等电点,大小等
7楼2013-04-26 10:00:29
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chyqiu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 帐篷灯 at 2013-04-26 10:00:29
你的buffer提醒能告知一下?还有蛋白的等电点,大小等...

没用缓冲,蛋白等电点5.2左右,但单独的蛋白是稳定的,现在是我的蛋白与多糖结合后,不稳定。
8楼2013-04-28 14:18:15
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mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

估计交联的太厉害了吧,如果结合工艺不改的话,成品加点盐,调调pH吧,或者直接冻起来保存,一次冻融的话问题不大
9楼2013-05-10 01:04:55
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yuanjun0106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
chyqiu: 金币+2, ★★★很有帮助, 很高兴,遇到同行! 2013-05-10 18:38:46
1.你的样品纯化收集后的浓度是多少?如果太高可以尝试收集后立即加生理盐水稀释;
2.层析纯化时洗脱液是什么?一般应为0.2N NaCl;
3.多糖衍生率和结合物的多糖蛋白比为多少?如果1、2均做到还是不行,要考虑调整工艺参数,我想你的结合物应该是要作为疫苗候选物,溶解性的问题不解决,安全性和免疫原性的研究也没法继续。

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10楼2013-05-10 11:53:49
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