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chyqiu

木虫 (著名写手)

[求助] 蛋白放置一段时间后出现沉淀的问题

脂多糖与蛋白结合后,经纯化后放在2-8℃几天后出沉淀的原因。请高手指点迷津。谢谢!
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yuanjun0106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
chyqiu: 金币+2, ★★★很有帮助, 很高兴,遇到同行! 2013-05-10 18:38:46
1.你的样品纯化收集后的浓度是多少?如果太高可以尝试收集后立即加生理盐水稀释;
2.层析纯化时洗脱液是什么?一般应为0.2N NaCl;
3.多糖衍生率和结合物的多糖蛋白比为多少?如果1、2均做到还是不行,要考虑调整工艺参数,我想你的结合物应该是要作为疫苗候选物,溶解性的问题不解决,安全性和免疫原性的研究也没法继续。

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悟
10楼2013-05-10 11:53:49
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256k

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-24 07:06:54
lz自己顶贴????  应该是不稳定变性了,分离出来跑跑胶看看就确切了。
3楼2013-04-23 12:23:50
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wushm388

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-24 07:07:29
(1)你的蛋白溶液是无菌的吗?若未除菌的话是回染菌导致沉淀。
(2)蛋白在4度长期放置会聚集(aggregation)或被氧化导致沉淀,可尝试加入蛋白稳定剂和抗氧化剂。
(3)改变蛋白贮藏条件。
4楼2013-04-23 14:12:42
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chyqiu

木虫 (著名写手)

我的蛋白单独放置不会出现沉淀,是与多糖共价结合以后,经凝胶柱纯化,除菌过滤后保存于4℃,但放置几天后就慢慢的出现沉淀了。请问加什么稳定剂比较好,试过加1%的甘油,但还是出现沉淀?
5楼2013-04-23 15:53:39
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