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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白放置一段时间后出现沉淀的问题
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chyqiu

木虫 (著名写手)

[求助] 蛋白放置一段时间后出现沉淀的问题

脂多糖与蛋白结合后，经纯化后放在2-8℃几天后出沉淀的原因。请高手指点迷津。谢谢！
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1楼 2013-04-23 10:28:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wushm388

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-24 07:07:29
（1）你的蛋白溶液是无菌的吗？若未除菌的话是回染菌导致沉淀。
（2）蛋白在4度长期放置会聚集（aggregation）或被氧化导致沉淀，可尝试加入蛋白稳定剂和抗氧化剂。
（3）改变蛋白贮藏条件。
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4楼2013-04-23 14:12:42
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普通回帖

chyqiu

木虫 (著名写手)
太好了
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2楼2013-04-23 10:29:16
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256k

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-24 07:06:54
lz自己顶贴？？？？  应该是不稳定变性了，分离出来跑跑胶看看就确切了。
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3楼2013-04-23 12:23:50
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chyqiu

木虫 (著名写手)
我的蛋白单独放置不会出现沉淀，是与多糖共价结合以后，经凝胶柱纯化，除菌过滤后保存于4℃，但放置几天后就慢慢的出现沉淀了。请问加什么稳定剂比较好，试过加1%的甘油，但还是出现沉淀？
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5楼2013-04-23 15:53:39
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)
自己顶帖子  哈哈哈哈哈哈哈哈哈
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6楼2013-04-25 10:31:37
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帐篷灯

铁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢参与，不过回帖更倾向于交流，而不是应助 2013-04-27 08:22:26
引用回帖:
5楼: Originally posted by chyqiu at 2013-04-23 15:53:39
我的蛋白单独放置不会出现沉淀，是与多糖共价结合以后，经凝胶柱纯化，除菌过滤后保存于4℃，但放置几天后就慢慢的出现沉淀了。请问加什么稳定剂比较好，试过加1%的甘油，但还是出现沉淀？

你的buffer提醒能告知一下？还有蛋白的等电点，大小等
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7楼2013-04-26 10:00:29
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chyqiu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 帐篷灯 at 2013-04-26 10:00:29
你的buffer提醒能告知一下？还有蛋白的等电点，大小等...

没用缓冲，蛋白等电点5.2左右，但单独的蛋白是稳定的，现在是我的蛋白与多糖结合后，不稳定。
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8楼2013-04-28 14:18:15
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mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

估计交联的太厉害了吧，如果结合工艺不改的话，成品加点盐，调调pH吧，或者直接冻起来保存，一次冻融的话问题不大
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9楼2013-05-10 01:04:55
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yuanjun0106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
chyqiu: 金币+2, ★★★很有帮助, 很高兴，遇到同行！ 2013-05-10 18:38:46
1.你的样品纯化收集后的浓度是多少？如果太高可以尝试收集后立即加生理盐水稀释；
2.层析纯化时洗脱液是什么？一般应为0.2N NaCl；
3.多糖衍生率和结合物的多糖蛋白比为多少？如果1、2均做到还是不行，要考虑调整工艺参数，我想你的结合物应该是要作为疫苗候选物，溶解性的问题不解决，安全性和免疫原性的研究也没法继续。
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chyqiu
悟
10楼2013-05-10 11:53:49
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