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chyqiu

木虫 (著名写手)

[求助] 蛋白放置一段时间后出现沉淀的问题

脂多糖与蛋白结合后,经纯化后放在2-8℃几天后出沉淀的原因。请高手指点迷津。谢谢!
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chyqiu

木虫 (著名写手)

太好了
2楼2013-04-23 10:29:16
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chyqiu

木虫 (著名写手)

我的蛋白单独放置不会出现沉淀,是与多糖共价结合以后,经凝胶柱纯化,除菌过滤后保存于4℃,但放置几天后就慢慢的出现沉淀了。请问加什么稳定剂比较好,试过加1%的甘油,但还是出现沉淀?
5楼2013-04-23 15:53:39
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chyqiu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 帐篷灯 at 2013-04-26 10:00:29
你的buffer提醒能告知一下?还有蛋白的等电点,大小等...

没用缓冲,蛋白等电点5.2左右,但单独的蛋白是稳定的,现在是我的蛋白与多糖结合后,不稳定。
8楼2013-04-28 14:18:15
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chyqiu

木虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by yuanjun0106 at 2013-05-10 11:53:49
1.你的样品纯化收集后的浓度是多少?如果太高可以尝试收集后立即加生理盐水稀释;
2.层析纯化时洗脱液是什么?一般应为0.2N NaCl;
3.多糖衍生率和结合物的多糖蛋白比为多少?如果1、2均做到还是不行,要考虑调整 ...

很高兴遇到同行了。
我的糖衍化率就是在2%左右,结合的多糖蛋白比06-0.8左右。工艺参数调整了很多,不同比例都摸过。纯化后收集的糖浓度低的150ug/ml左右,高的400ug/ml左右,但放置一段时间后都出现沉淀。
希望继续得到你的帮助!
11楼2013-05-10 18:36:51
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