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huangxinqi20

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[求助] 蛋白沉淀后不能复溶~！

想提取一株短小芽孢杆菌产生的活性蛋白，发酵液中加入硫酸铵使其沉淀，蛋白沉淀加入PBS不能溶解，然后在PBS中透析，透析完了蛋白还是不能复溶，呈胶体状，我试了加NaOH调节ph到12左右才可以使蛋白溶解。但又怕蛋白变性，想问问大家有没有其他办法使其溶解，不然不好上柱分离啊。

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1楼 2011-07-10 13:58:04

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smisuccess

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引用回帖:

80285楼: Originally posted by huangxinqi20 at 2011-07-10 13:58:04:
想提取一株短小芽孢杆菌产生的活性蛋白，发酵液中加入硫酸铵使其沉淀，蛋白沉淀加入PBS不能溶解，然后在PBS中透析，透析完了蛋白还是不能复溶，呈胶体状，我试了加NaOH调节ph到12左右才可以使蛋白溶解。但又怕蛋白 ...

请问楼主你的蛋白最后溶解了吗，我现在也在做有关蛋白的，也遇到了跟你一样的情况？

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5楼2012-04-26 16:01:14

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冼亮淀粉酶

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西瓜(金币+2): Good 2011-07-10 21:44:37

硫酸铵沉淀的梯度有没有摸索？不会早就失活了吧？

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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。

2楼2011-07-10 18:51:41

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huangxinqi20

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dhd997: 把信息汇总在一楼吧。可以编辑的。 2011-07-11 07:48:44

做了梯度，30%以下没活性，30%-60%的沉淀检测有活性，所以应该没有失活。

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3楼2011-07-10 23:25:43

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沧海飞雪

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【答案】应助回帖

我也是用的硫酸铵沉淀法，沉淀完了想过HPLC分离，但是不知道用什么溶剂能即复溶又适合过柱子！请问楼主的问题是怎么解决的？求帮助！

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6楼2012-10-18 10:21:50

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