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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 冷乙醇沉淀蛋白原理，如何操作
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小新3858

木虫 (正式写手)

[求助] 冷乙醇沉淀蛋白原理，如何操作

有没有做过冷乙醇沉淀浓缩蛋白的虫虫，大家交流下，沉淀原理是什么，该如何操作

[ Last edited by 小新3858 on 2013-1-6 at 13:51 ]
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1楼2013-01-06 13:49:21
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回帖置顶 ( 共有1个 )

xmchh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小新3858: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-06 15:19:38
amisking: 回帖置顶 2013-01-06 19:50:34
1.蛋白质含量，愈高，共沉多；反之，分离愈彻底。当然有度。溶液太稀了，成本高。2。离子强度：这与介电强度有关。3。溶液pH值：调到目标蛋白等电点周围。4。乙醇浓度：一般来说乙醇浓度多少，与目标蛋白的分子量有关：比如8%，可沉淀纤维蛋白原，20%可沉淀球蛋白，40%可沉淀白蛋白等等，当然，乙醇浓度与溶液pH值配合使用。加入乙醇不能过快，防止局部过浓。要边加边摇动。 否则，共沉多！或者局部变性。5。溶液温度：必须低温，乙醇反应是个放热反应，如果温度高，可引起蛋白质变性，不可逆的变形。这五变参数，要综合，动态的调整，可达到精确分离蛋白质的作用。
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3楼2013-01-06 15:14:59
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普通回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小新3858: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-06 14:21:45
酒精变性或有机相的溶解度低而析出，使得蛋白沉淀下来。这是非常早期使用的方法，很多蛋白沉淀后，非常难复溶。如果你的蛋白有现成的方法，就用，如血清蛋白的Cohn分级！否则不建议你用此法！
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shine
2楼2013-01-06 13:59:21
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cqlsf

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小新3858: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢~ 2013-01-07 11:57:53
乙醇改变蛋白质表面电荷，有机相导致蛋白变性，使原溶解状态的蛋白在不同的溶剂中溶解度不同 致沉淀。
有些变性是可逆的，有些是不可逆的，看你是否需要保存蛋白活性，选择合适的方法，祝顺利！
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老顽虫是大酱油滴：知新，行知，业精于勤。。。木虫的闺蜜叫木马。。
4楼2013-01-07 09:11:35
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和谐村

金虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 应助指数-1, 违规存档, 谢谢参与,但是非应助，请不要刷应助指数 2013-01-08 05:22:37
没做过乙醇沉淀蛋白质，做过甲醇的。。
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5楼2013-01-07 21:08:10
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小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 和谐村 at 2013-01-07 21:08:10
没做过乙醇沉淀蛋白质，做过甲醇的。。

6楼2013-01-08 10:26:24
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