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小新3858

木虫 (正式写手)

[求助] 冷乙醇沉淀蛋白原理,如何操作

有没有做过冷乙醇沉淀浓缩蛋白的虫虫,大家交流下,沉淀原理是什么,该如何操作

[ Last edited by 小新3858 on 2013-1-6 at 13:51 ]
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小新3858: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-06 14:21:45
酒精变性或有机相的溶解度低而析出,使得蛋白沉淀下来。这是非常早期使用的方法,很多蛋白沉淀后,非常难复溶。如果你的蛋白有现成的方法,就用,如血清蛋白的Cohn分级!否则不建议你用此法!
shine
2楼2013-01-06 13:59:21
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xmchh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小新3858: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-06 15:19:38
amisking: 回帖置顶 2013-01-06 19:50:34
1.蛋白质含量,愈高,共沉多;反之,分离愈彻底。当然有度。溶液太稀了,成本高。2。离子强度:这与介电强度有关。3。溶液pH值:调到目标蛋白等电点周围。4。乙醇浓度:一般来说乙醇浓度多少,与目标蛋白的分子量有关:比如8%,可沉淀纤维蛋白原,20%可沉淀球蛋白,40%可沉淀白蛋白等等,当然,乙醇浓度与溶液pH值配合使用。加入乙醇不能过快,防止局部过浓。要边加边摇动。 否则,共沉多!或者局部变性。5。溶液温度:必须低温,乙醇反应是个放热反应,如果温度高,可引起蛋白质变性,不可逆的变形。这五变参数,要综合,动态的调整,可达到精确分离蛋白质的作用。
3楼2013-01-06 15:14:59
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cqlsf

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小新3858: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢~ 2013-01-07 11:57:53
乙醇改变蛋白质表面电荷,有机相导致蛋白变性,使原溶解状态的蛋白在不同的溶剂中溶解度不同 致沉淀。
有些变性是可逆的,有些是不可逆的,看你是否需要保存蛋白活性,选择合适的方法,祝顺利!
老顽虫是大酱油滴:知新,行知,业精于勤。。。木虫的闺蜜叫木马。。
4楼2013-01-07 09:11:35
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和谐村

金虫 (著名写手)


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 应助指数-1, 违规存档, 谢谢参与,但是非应助,请不要刷应助指数 2013-01-08 05:22:37
没做过乙醇沉淀蛋白质,做过甲醇的。。
5楼2013-01-07 21:08:10
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小新3858

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 和谐村 at 2013-01-07 21:08:10
没做过乙醇沉淀蛋白质,做过甲醇的。。

6楼2013-01-08 10:26:24
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